随着医院对输血前住院患者梅毒血清学的筛查,作者发现许多老年患者梅毒螺旋体(TP)抗体阳性而没有任何相关症状。有学者认为老年TP抗体存在较高的假阳性率,也有学者认为其假阳性率极低。为探讨老年住院患者梅毒感染情况,作者对阜阳市人民医院住院的60岁以上老年患者输血前TP抗体阳性率进行统计,并对阳性样本进行快速血浆反应素试验(RPR)和梅毒螺旋体IgG免疫印迹试验(TP-WB-IgG)及梅毒螺旋体IgM免疫印迹试验(TP-WB-IgM)检测,现将结果报道如下。
1、资料与方法
1.1一般资料
2011年1月1日至2012年2月22日本院输血前做梅毒血清学检测的60岁以上老年住院患者8303例,其中男4529例,女3774例,年龄60~111岁。
1.2仪器与试剂
芬兰雷勃MK-3全自动酶标仪,上海迅达XD-236全自动蛋白印迹分析仪,德国欧蒙EUROBlotCamera印迹法自动成像仪。梅毒酶联免疫吸附试验(TP-ELISA)试剂由英科新创(厦门)科技有限公司提供,梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)试剂由珠海丽珠试剂有限公司提供,快速血浆反应素试验(RPR)试剂由上海科华有限公司提供,梅毒螺旋体免疫印迹试验(TP-WB)试剂由德国欧蒙医学实验诊断股份公司提供,试剂均在有效期内使用。
1.3方法
用ELISA试剂进行梅毒抗体筛查,标本的测定值与临界值之间的比值(S/CO值)大于1判为阳性。阳性样本用TPPA复查,以稀释倍数大于1∶80出现凝集判为阳性。
TP-ELISA和TPPA均为阳性样本判为TP抗体阳性,再对其进行RPR及TP-WB-IgG和TP-WB-IgM检测。操作严格按照各自说明书进行。
1.4TP-WB法结果判断欧蒙公司TP-WB试剂膜条有4条特异性抗原带,分别为TPN15、TPN17、TPN45、TPN47。TP-WB-IgG结果为:未出现抗原带判为阴性、1条抗原带着色为临界,2条及以上抗原带着色为阳性。
TP-WB-IgM结果为:未出现抗原带判为阴性、1条着色不明显判为临界、1条及以上明显着色判为阳性。采用EUROBlotCamera印迹法自动成像仪进行膜条图片成像与保存,试验结果用EUROLineScan软件判读。
1.5统计学处理采用SPSS13.0统计学软件进行数据处理;计数资料以百分率表示,组间率的比较采用χ2检验;以α=0.05为检验水准,P<0.05为差异有统计学意义。
2、结果
2.1老年患者输血前梅毒抗体阳性的临床分布
8303例老年住院患者血清共检出梅毒抗体阳性109例,阳性率为1.31%。梅毒抗体阳性老年患者分布在临床各科,其中外科系统71例、内科系统38例,最大年龄97岁。这些患者入院诊断无1例梅毒,出院诊断有5例合并梅毒,其中1例为二期梅毒,1例三期梅毒,3例隐性梅毒,其余未做梅毒诊断。
2.2不同性别老年患者输血前梅毒抗体阳性率比较
男性老年住院患者梅毒抗体阳性77例(1.70%)明显高于女性32例(0.85%),差异具有统计学意义(χ2=11.54,P<0.05)。
2.3不同年龄组老年患者梅毒抗体阳性率比较
老年患者中,90~99岁组梅毒抗体阳性率最高为10.17%,明显高于60~69、70~79、80~89岁组的梅毒抗体阳性率,比较差异均有统计学意义(P<0.05);且抗体阳性率随着年龄的增高而增大(100岁组因人数较少未参与比较)。见表1。
2.4梅毒抗体阳性的样本RPR的检出结果
109例梅毒抗体阳性样本中共检出RPR阳性43例,检出率为39.45%;其中滴度为1∶1的25例,1∶2的11例,1∶4的2例,1∶8的1例,1∶32的1例,1∶128的1例,1∶256的2例。
2.5TP抗体阳性标本S/CO值和WB结果从109例梅毒抗体阳性的样本中随机选取50例,进行TP-WB-IgG及TP-WB-IgM检测,并依样本TP-ELISA的S/CO值以10.0为分界点分为2组进行比较,结果见表2。
3、讨论
梅毒是由苍白螺旋体引起的一种性传播疾病,临床诊断必须依靠病史、临床症状及实验室检查。梅毒的实验室检查分两种,一种是非密螺旋体抗体试验如:RPR、甲苯胺红快速反应素试验(TRUST),主要检测梅毒螺旋体感染人体后产生的抗心磷脂抗体;另一种密螺旋体抗体试验如:TP-ELISA、TPPA、梅毒螺旋体血凝试验(TPHA)、荧光梅毒螺旋体抗体吸附试验(FTA-ABS)、TP-WB等,用于检测针对梅毒螺旋体的IgG和(或)IgM特异性抗体。对医院术前及输血前患者梅毒的筛查,本院借鉴目前国内外较多实验室推广的反向筛查法(RSSS),即先用ELISA或化学发光法(CIA)筛查,阳性样本再行RPR或TRUST检测,不一致的样本用TPPA确认。为避免方法学造成的假阳性,本院对ELISA筛查的阳性样本,全部经TPPA确认。
RPR检测的是非特异性抗体,主要用来观察疗效和判断活动性,活动性梅毒的滴度多在1∶8~1∶64甚至更高,早期梅毒患者经有效治疗后,该抗体可逐渐消失。本组TP抗体阳性的老年人RPR阳性率为39.45%,但多数滴度小于1∶8(38/43),说明老年住院患者梅毒的感染大多数不在活动期。
RPR持续阳性可能因为老年患者当时的环境造成的治疗不彻底而形成血清固定,或因为老年患者所患基础病可使机体释放诱导产生抗类脂抗体。有学者报道,丙型肝炎阳性的患者有梅毒RPR的生物学假阳性;但本组RPR阳性的样本中并无丙型肝炎抗体阳性。
TP-ELISA和TPPA及TP-WB-IgG检测的都是抗梅毒螺旋体特异抗体,该抗体即使经过足够的治疗,仍能长期存在,甚至终身不消失。本研究结果显示,60岁以上老年住院患者TP抗体阳性率为1.31%,低于李娜等报道的老年人群TP抗体阳性率(2.15%),可能和本研究对阳性样本的认定较严格有关;但明显高于刘冬生等[12]报道的总住院患者梅毒阳性率(0.58%),说明即便采取双阳性的严格判断标准,老年人的TP抗体阳性率仍然较高。其中男性高于女性,差异具有统计学意义(P<0.05),和文献[13]所报道的结果相一致,可能和男女性观念差异有关。老年患者随着年龄的增加TP抗体阳性率逐渐增高,90~99岁组高达10.17%,但100~111岁组6例中,没有检出TP抗体,可能因为人数较少。这些老年患者并非梅毒高危人群,通过性感染的可能性很小,而且RPR多为低滴度或阴性,大都没有临床症状,作者认为多数可能还是治愈后的既往感染或隐性感染,临床应加强对这部分患者的鉴别诊断。但90~99岁组存在高TP抗体阳性率,还需要大样本进一步研究。
TP-WB-IgM检测的是感染梅毒后首先出现的特异性抗体IgM,一般感染2周即可从血清中检出,主要用于早期感染、胎传梅毒、神经梅毒的诊断。有学者研究认为,TP-IgM阳性提示近期感染或再感染,以及梅毒螺旋体处于活动复制状态,多具有传染性,治疗后该抗体可以消失。本组TP抗体阳性的老年患者,TP-WB-IgM的检出率仅为4%,说明大多数患者不处于梅毒早期感染。
TP-WB-IgG检测的是梅毒螺旋体的特异性抗体IgG,已被建议为梅毒抗体检测的确认试验。研究中发现,TP-ELISA的S/CO>10时,TP-WB-IgG的阳性率为73.8%,TP-WB-IgM阳性率为4.8%;S/CO<10时,TP-WB-IgG阳性率为50.0%,TP-WB-IgM阳性率为0.0%,S/CO<5时,TP-WB抗体全部阴性。如果以TP-WB-IgG作为确认试验,在TP-ELISA和TPPA抗体双阳性的样本中,只有70%的符合率,而且S/CO越低,符合率越低。因此建议对临床怀疑的样本和S/CO值较低的样本,进行WB进一步确认。
TP-WB检测是针对梅毒螺旋体TPN15、TPN17、TPN45、TPN47的特异性抗原带。本研究中发现,7例TP-WB-IgG为临界结果的都是出现1条TPN17条带,这在老年梅毒的诊断中有一定的意义,将在以后继续搜集大样本进一步研究。
2例RPR滴度为1∶256阳性患者,其中1例为泌尿科67岁男性,TP-WB-IgG阳性、TP-WB-IgM阴性,临床诊断为二期梅毒;另1例为眼科92岁男性,在白内障术前准备中发现TP-ELISA阳性,S/CO值为19.3、TPPA阳性、RPR为1∶256阳性、TP-WB-IgM阳性、TP-WB-IgG阳性,经皮肤性病科会诊没有任何梅毒症状,患者为离休老干部,10年前丧偶,无输血史,无不良嗜好,否认有梅毒感染史,血清抗核抗体阴性,2d后重抽血复查结果相同,原因并不明确。有学者报道老年白内障患者梅毒抗体阳性率较高,但和同期其他老年人相比没有显著差别。作者认为针对这类患者的梅毒感染诊断与治疗需要引起医务工作者的进一步讨论。
综上所述,60岁以上老年患者输血前梅毒血清学阳性率较高,但临床确诊病例较少,可能因为大部分老人没有临床症状,不能确定是否有接触史。血清学试验阳性,只能提示血清中有抗类脂抗体或抗TP抗体存在,不能作为感染梅毒螺旋体的绝对依据,阴性结果也不能排除梅毒螺旋体感染[9]。老年人体内干扰物质较多,诊断梅毒还需要结合临床症状及病史综合分析。
参考文献：
[1]卢秋维,甘昌鑫.免疫印迹法对梅毒螺旋体抗体不确定标本的确认分析[J].广东医学,2010,31(15):2000-2001.
[2]郑颖,徐冬梅,丁文杰,等.老年患者抗梅毒螺旋体抗体阳性与免疫印迹法结果的对比分析[J].中华医院感染学杂志,2012,22(18):4054-4055.
