dPCR可以对样品进行绝对定量，直接检测出样品中的拷贝数，相对于qPCR,不需要建立标准曲线，灵敏度更高；dPCR通过分液，提高了PCR反应对抑制剂如SDS、EDTA、肝素的耐受程度，特别是环境、粪便样本[5];然而，qPCR由于受到抑制剂的影响，扩增效率往往会偏低（表2）。
qPCR方法是对反应体系中荧光信号进行实时收集，通过反应的循环阈值，对初始模板进行检测和定量，主要应用于病原体的检测和定量，基因表达的相对定量，单核苷酸多态性分析，检测的动态范围广；而dPCR方法是将PCR反应体系进行分液，通过读取荧光信号的有或无进行计数，直接得出样品的拷贝数，可应用于病毒载量的绝对定量，拷贝数的变异分析，罕见突变的检测等，相比于qPCR,检测的灵敏度更高，本文也对dPCR和qPCR在应用方向上进行了比较。
3 dPCR的应用。
3.1病毒载量的绝对定量。
目前，有 研 究 比 较 了 不 同 的dPCR平 台 和qPCR对HIV DNA的定量，结果显示QX100和Quantstudio dPCR的 变 异 系 数 分 别 为14.3%和17.5%低于qPCR的42.8%,表明dPCR的定量结果更 加 准 确；针 对 病 人 样 本HIV DNA的 检 测，QX100dPCR的检出率为80%高于qPCR的检出率62%[6].另有研究利用微滴式dPCR对戊型肝炎病毒的RNA进行定量，微滴式dPCR的分析灵敏度为80（IU）/mL,微滴式dPCR和qPCR对临床样本 的 定 量 有 很 好 的 一 致 性，秩 相 关 系 数rs为0.89[7].因此，dPCR可以对核酸的病毒载量进行绝对定量，且有较高的灵敏度。
Sanders等评价了dPCR对DNA和RNA绝对定量的准确度、灵敏度和重复性[8,9],为后期的定量研究提供了基础依据。2012年，Pinheiro等[10]确定了微滴式dPCR对Lambda DNA的检测范围在37-131 000拷贝/反应，线性关系R2=0.9994,有效的对Lambda DNA进行了定量。White等[11]第一次利用dPCR对GBV-C RNA病毒进行了绝对定量，逆转录dPCR的检出限在每反应中3~10个模板分子，表明dPCR在低丰度的样本中，有更好的扩增。有研究也利用逆转录dPCR对水生RNA病毒成功的进 行 了 定 量[12].2016年，Yan等[13]对 感 染H7N9的病人连续采取十个不同治疗期的样本进行检测定量，针对qPCR检测阴性的样本，dPCR仍检测出病毒的存在，表明dPCR定量H7N9病毒载量比qPCR更灵敏。
3.2产前诊断。
传统的产前诊断方法为侵入性的如羊膜穿刺、绒毛膜取样，这存在一定风险的胎儿丢失，利用超声波或生物化学标记对样品进行筛查。非侵入产前诊断（无创产前诊断）对胎儿的影响较小，检测更加准确，成为目前新的诊断方法。1997年，Lo等[14]发现母体内胎儿游离DNA（Cell-freefetal DNA,cffDNA）的存在，为无创产前检测提供了可能。2007年，Lo等[15]利用新的dPCR方法无创伤的检测了cffDNA中的非整倍染色体，通过检测孕妇血浆中21号染色体上PLAC4 mRNA的SNP等位基因的不平衡性；及评价胎儿DNA中21号染色体的含量与参照染色体相比是否过表达，可检测含有25%cffDNA血浆样本中21号染色体的整倍性。有研究比较了dPCR和RT-PCR对孕妇血浆中cffDNA的定量效果，表明微流体数字PCR比RT-PCR有更小的偏倚，dPCR的定量准确度是传统RT-PCR的3.1倍，两者定量的变异系数分别为16%和49%,检 测 的 灵 敏 度 分 别 为100%和90%[16].2012年，Barrett等[17]利用dPCR的方法对孕妇血浆中cffDNA进行了镰状红细胞贫血的检测。此外，dPCR在检测样本中罕见基因突变上也有自己的优势，有研究利用dPCR检测了X染色体的基因位点，成功识别了血友病的突变基因及胎儿的Rh血型[18,19].
3.3癌症诊断检测。
MicroRNA（miRNA）是一类由内源基因编码的长度约为19~24个核苷酸的非编码单链RNA分子。MicroRNA在细胞增殖、分化与凋亡过程中发挥重要功能，其也与癌症的发生关系密切，被当作癌症标志物[20,21].Hindson等[22]系统的建立了微滴式dPCR检测和定量microRNA的方法。2013年，Ma等[23]利用微滴式dPCR技术定量了非小细胞性肺癌病人血浆中低丰度的mi-croRNA的含量，dPCR对microRNA的检测范围在1~10 000拷贝/μL;相比qPCR,dPCR定量mi-croRNA的拷贝数 有更高 的 灵 敏 度，可 对 血 浆 中miR-21-5p和miR-335-3p定 量，qPCR只 能 定 量miR-21-5p.通过利用QuantStudio 3DdPCR也成功对血浆样本中的microRNA的含量进行了有效的定量[24].2014年，Li等[25]利用微滴dPCR定量痰标本中的microRNA进行肺癌诊断，表明dPCR可以对痰标本中的miR-31和miR-210绝对定量，为肺癌的临床诊断提供了新的技术。有研究利用dPCR技术检测样品中极微量的基因和罕见基因突变，如表皮生长因子及K-RAS基因突变，对癌症进行诊断检测[26-28].
3.4下一代测序技术的应用。
随着测序技术的发展，下一代测序技术（Next generation sequencing,NGS）应运而生。近年来，NGS技术得到了快速的发展，特别是在临床病原微生物的鉴定，发挥了重大作用[29].为了获得高质量的测序结果，测序文库的准确定量是必要的。White等[30]利用微流体dPCR对454和Solexa测序平台的文库进行了准确定量，dPCR的 变 异 系 数 为11.8%明 显 低 于qPCR的21.2%,结果更加准确，并对纳克级的细菌及哺乳动物的DNA进行了测序。通过对NGS文库定量方法的比较，dPCR的定量结果更加灵敏和准确[31].利用dPCR方法实现了测序文库的绝对定量，降低了样本的用量。
