淋病（GU）是由淋病奈瑟菌感染引起的以泌尿生殖道化脓性炎症为主要临床表现的性传播疾病。该病临床表现缺乏特异性，诊断主要依靠实验室检查，传统的方法有直接涂片法、分离培养法。随着分子生物学技术的迅猛发展，聚合酶链式反应（PCR）技术广泛应用于临床，实时荧光核酸恒温扩增检测技术（SAT）成为一种最新的检测手段。2013年 1 月至 2014 年 3 月来本院妇科门诊就诊的女性疑似淋病患者 153 例，笔者分别采用直接涂片法、分离培养法、SAT法进行淋球菌检测，并对结果比较分析，为期临床医生正确选择检测方法提供参考。
1 资料与方法
1.1 一般资料 女性疑似淋病患者 153 例，年龄 18~55岁，均有不同程度的尿道口红肿，分泌物增多，脓性白带，尿频、尿急、尿痛等临床表现。
1.2 标本采集 拭子标本采集 :妇产科医师用特制无菌棉拭子伸入患者宫颈口 1~2cm,旋转 1 周，停留 10 秒后采集分泌物标本，一式 3 份，分别置于无菌采样管中立即送检。其中一份拭子在 1.5ml 生理盐水中洗涤，震荡混匀后吸取 1ml 至另一只装有 1ml 样本保存液（SAT 试剂盒组分）的标本管中混匀，置于 -20℃保存备用，用于 SAT检测。
1.3 检测方法 ① 直接涂片法：患者拭子标本采集后立即进行革兰涂片染色，油镜下查找革兰阴性双球菌，以在多形核白细胞内或胞外发现革兰阴性双球菌为阳性。快速革兰染色试剂盒购自珠海贝索生物技术有限公司。② 分离培养法：另取一支拭子接种于 T-M 培养基上，置 35℃、5%CO2环境培养 24~48 小时，将培养获得的可疑菌落严格按鉴定程序进行鉴定。培养基购自上海科玛嘉微生物技术有限公司，采用生物梅里埃 VITEK-2 全自动细菌鉴定及药敏系统和配套试剂鉴定分析。设定分离培养结果为金标准。③ SAT检测：另取已留取的拭子洗脱液标本进行 SAT 检测，SAT检测试剂盒和核酸提取仪由上海仁度生物科技有限公司提供，LightCycler480 实时荧光定量 PCR 仪购自 Roche公司，严格按照操作说明书进行相关检测。
2 结果
由表 1 可见，以分离培养法结果作为金标准，直接涂片法的灵敏度为 63.0%（46/73），特异度为 97.5%（78/80）；SAT 检测灵敏度为 95.9%（70/73），特异度为 88.8%（71/80）。
3 讨论
我国女性淋病患病率高于男性，但约有 60% 的女性淋病患者无明显自觉症状，呈隐性感染或带菌状态[1].无症状女性淋病患者在传播淋球菌感染中起重要作用。并且由于女性生殖器官生理解剖的不同，女性宫颈较男性尿道更易感染，因此患病率可能会更高[2].淋球菌逆行感染可以引起泌尿生殖道炎症，导致育龄妇女不孕、宫内感染、流产、早产，甚至死胎[3],更可引起新生儿淋病，促进其他性传播病原体感染，引起新生儿失明[4].因此，在孕前体检中准确地筛查出女性淋病患者对预防新生儿淋病，优生优育有重要的意义。
淋病的实验室诊断方法多样，不同的方法有各自的优缺点和适用范围。本文采用临床常用的三种不同方法检测淋球菌。传统的直接涂片法操作简单，不需特殊的仪器，适宜在基层医院开展，且能在较短的时间内得出结果，费用低廉，但灵敏度低，尤其对于合并女性慢性病患者或经抗生素治疗后的病例，淋球菌数量较少，阴道分泌物中杂菌较多，经治疗后淋球菌可以发生形态变异，常会出现假性结果[5].
分离培养法是 WHO 推荐的诊断淋病的金标准，但由于淋球菌对环境要求高，且有自溶酶，对标本的采集，运送要求较高，培养时间需数日，容易延误病情，同时还可能因标本量的过少、抗生素的使用、接种后病原微生物不成活等因素而导致误诊。
SAT 是建立在 RNA 恒温扩增和实时荧光检测技术基础的第二代核酸检测技术，具有很高的灵敏度和特异性，准确快速。它检测的是病原体 RNA,因活菌中才有完整的 RNA 片段，因此相当于检测活菌，有利于临床用药后的疗效监测及判愈。RNA 在环境中极不稳定，容易降解，大大降低了核酸扩增检测交叉污染引起的假阳性问题，污染概率小[6].SAT 法特异性强，本文灵敏度为 95.9% 远高于直接涂片法的 63.0%,对于临床症状不典型的疑似病例或经抗生素治疗后的女性淋病患者，能提高检出率，具有很好的补充作用，但该方法对于实验室环境，仪器要求高，操作者需经专业培训，实验全过程必须有效的防污措施，杜绝交叉污染。
综上所述，临床医生在实际诊疗过程中应该根据患者的病情正确选择检测方法，对于症状典型的急性期患者可以选用直接涂片法进行快速筛选，对于慢性或治疗后的患者，宜选用培养法，有基因诊断条件的医疗机构可以选用SAT 检测，其灵敏度及特异度高。通过正确选择检测方法，做出准确的诊断，为患者提供及时有效的治疗。
参 考 文 献
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