摘 要： 目的：研究一种无毒无害、经济、易于配制的人体标本保存液。方法：用无毒无害的防腐试剂配制一种人体标本保存液，并与广泛使用的5%的甲醛保存液的保存效果进行对比。结果：无毒无害人体标本保存液在标本杀菌、防霉、安全、无毒害方面都有良好表现。结论：无毒无害人体标本保存液完全可以替代5%甲醛保存液进行人体标本的保存。
关键词： 无毒无害; 人体标本; 保存液;
Abstract： Objective: To study a non-toxic, harmless, economical and easy-to-prepare preservation solution for human specimens. Methods: A preservative solution for human specimens was prepared with non-toxic and harmless preservative reagent, and its preservation effect was compared with that of 5% formaldehyde preservative solution widely used. Result: The non-toxic and harmless preservation solution of human specimens has good performance in germicidal, mildew-proof, safe and non-toxic aspects. Conclusion: The non-toxic and harmless preservation solution of human specimens can completely replace 5% formaldehyde preservation solution for the preservation of human specimens.
Keyword： Non-toxic and harmless; Human specimen; Preservation solution;
人体解剖学是医学院校最为基础的一门形态学科，直观性强，其实践教学非常重要。在科学技术飞速发展的时代，人体解剖学的教学与学习资源被极大地丰富，如树脂模型、塑化标本、多媒体教学资源基本上在医学院校得到了普及，有的医学院校甚至引进了更为先进的数字人系统、虚拟解剖系统。但是，在人体解剖学的教学中，任何类型的教学资源都代替不了人体标本在解剖教学中的地位。人体标本在教学中更能引起学生的注意，引起学生的兴趣，人体标本更能够形象地反映人体的真实结构。所以，在人体解剖学的实际教学中，教师主要通过人体标本示教进行教学，学生主要通过对人体标本的观察进行学习。从长远来看，人体标本是稀缺资源，为了更好地、多次重复地利用好人体标本，就必须解决好人体标本的保存问题。在人体解剖学发展史上，长期以来5%甲醛水溶液在人体标本保存方面起着重要作用。甲醛，化学式HCHO，又称蚁醛，易溶于水和乙醇。甲醛水溶液的浓度最高可达55%，通常使用的是35%～40%的甲醛水溶液，称福尔马林，是有强烈刺激气味的无色液体。大量研究证实，甲醛属于剧毒物质，对人体存在着巨大的危害作用[1]。甲醛的主要危害如下。（1）急性中毒：表现为咽喉烧灼痛、呼吸困难、肺水肿、过敏性紫癜、过敏性皮炎、肝转氨酶升高、黄疸等。（2）慢性中毒：长期、低浓度接触甲醛会引起头痛、头晕、乏力、感觉障碍、免疫力降低，并可出现瞌睡、记忆力减退或神经衰弱、精神抑郁，也可引发呼吸功能障碍和肝中毒性病变，表现为肝细胞损伤、肝功能异常等。（3）致突变：近年来发现，甲醛能引起哺乳动物细胞核的基因突变、染色体损伤、断裂。（4）致癌性：研究发现，长期接触甲醛的人群增大患霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、骨髓性白血病等癌症的概率。
甲醛虽然对人体存在着巨大的危害，但甲醛极易与蛋白质氨基结合使其变性，又能固定脂类物质，渗透力强，灭菌、防腐效果良好，而且还具有配制方便、价格便宜等诸多优点。所以，5%甲醛水溶液仍然是目前最为常用的人体标本保存液。鉴于甲醛在人体标本防腐方面的几乎不可替代性，以及对人体健康严重的危害作用，近年来，一些有条件的院校采用抽风式解剖台或实验室自动送风、抽风设备,用来消除、减少实验室甲醛气体从而净化环境。可是这些设备较为昂贵，一些办学规模小、资金困难的院校难以实现；另外，这些设备将大量甲醛气体排入大气，同样污染了环境。所以，笔者从2011年开始探索，至2016年逐渐研究、试用并确定了一种无毒无害、价格便宜、配制简便的人体标本保存液。本研究将无毒无害人体标本保存液与5%甲醛水溶液对标本的保存效果进行对比研究。
1、 材料与方法
1.1、 保存液的配制
1.1.1、 甲液（无毒无害人体标本保存液）的配制
从2011年开始，选用市场常见、价格低廉、食品级的防腐剂，通过反复配伍、比较，确定了一种防腐效果非常满意的无毒无害人体标本保存液，其配方为：30%乙醇（95%）、2%山梨酸钾、18%氯化钠、50%自来水。在配制过程中，先将自来水与乙醇混合，然后缓缓加入氯化钠与山梨酸钾，同时进行搅拌，直至完全溶解。
1.1.2、 乙液（5%甲醛水溶液）的配制
使用福尔马林与自来水按1∶10进行配制。
1.2、 两种保存液细菌总数测定实验
取甲液与乙液定期进行细菌总数测定的实验来评价其杀菌效果。采用牛肉膏蛋白胨琼脂37℃培养48 h、平板计数技术测定细菌总数的方法，测定1 mL甲液、乙液在不同保存时间里细菌菌落的总数。
1.3、 人体标本保存效果观察
甲液、乙液各配制200 L，在甲、乙两种液体中各放置经10%甲醛固定一年的人体标本：包括躯干标本、上肢、下肢标本各1件、小型局部标本10件。保存1年、2年后观察保存液透明度、标本色泽、保存效果、是否霉变。
2、 结果与分析
2.1、 甲、乙保存液细菌培养结果
在保存人体标本1天、15天、3月、6月、1年、2年、3年后，取甲液、乙液进行细菌总数测定，测定结果见表1。
表1 甲、乙两种标本保存液杀菌效果（CFU/mL)
从表1可以看出：甲液与乙液相比，杀菌起效时间较慢，但是二者长期杀菌效果明显、稳定。
2.2、 人体标本保存效果观察
从表2可以得出：（1）甲液在人体标本保存过程中，液体透明程度好，标本没有霉变，这两方面与乙液相仿；（2）在保存人标本色泽方面，甲液浸泡过的人体标本色泽较淡，乙液浸泡的人体标本色泽较深，这一点对于解剖操作没有本质影响；（3）在固定效果方面，甲液浸泡的人体标本较柔软、松弛，给解剖操作带来一定难度，不如乙液效果好，应在以后的研究中注意改进；（4）在气味刺激性方面，甲液芳香、无刺激性，对人体健康无任何毒害作用，明显优于乙液。
表2 甲、乙两种标本保存液对人体标本效果观察
3、 讨论
研究表明，无毒无害人体标本保存液虽然有一定的不足之处，但是优点明显，完全可以取代传统的5%甲醛水溶液对人体标本进行保存，是一种优良、廉价的人体标本保存液。此保存液的研究成功在于合理选配防腐药品，从不同机理抑制、杀灭微生物，从而得到良好的防腐作用。同时，所选药品均为食品级的防腐剂，对人体健康无任何毒害作用。
3.1、 乙醇在保存液中的作用
乙醇具有杀菌消毒、保护组织、使细胞脱水、防止腐败的作用。医用消毒酒精的乙醇浓度一般为70%～75%，过高浓度的酒精会在细菌表面形成一层保护膜，阻止其进入细菌体内，难以将细菌彻底杀死[2]；若酒精浓度过低，虽可进入细菌，但不能将其体内的蛋白质凝固，同样也不能将细菌彻底杀死。无毒无害人体标本保存液中乙醇浓度虽然较低，不足以起到杀菌作用，但是加入后可加强其他药品对组织的渗透作用，还可以作为山梨酸钾的溶剂。保存液中使用95%的工业酒精即可满足要求，而且价格相对便宜。
3.2、 山梨酸钾在保存液中的作用
山梨酸钾（2,4-己二烯酸钾）是山梨酸的钾盐，为无色至白色鳞片状结晶或结晶性粉末，无臭或稍有臭味，易溶于水，暴露在空气中不稳定，有吸湿性，能被氧化着色。山梨酸钾是国际粮农组织和世界卫生组织推荐的高效、安全的防腐保鲜剂，广泛应用于食品、饮料、烟草、农药、化妆品等行业，与人体皮肤接触基本没有任何危害。山梨酸钾能有效地抑制霉菌、酵母菌和好氧性细菌的活性，还能防止肉毒杆菌、葡萄球菌、沙门氏菌等有害微生物的生长和繁殖，其抑制发育的作用比杀菌作用更强[3]。其防腐效果是同类产品苯甲酸钠的5～10倍。人体标本，如果温度、湿度、环境卫生条件等因素控制不当，标本中的各种细菌微生物中的酶就会不断发生新陈代谢作用，标本中的饱和脂肪酸被氧化并发生脱氢现象，形成不饱和脂肪酸，导致标本腐烂变质。山梨酸钾主要的杀菌原理是抑制微生物体内脱氢酶系统，无毒无害标本保存液中加入适量的山梨酸钾会控制脱氢酶的活动，从而抑制各种微生物在标本中繁殖。同时山梨酸属于一种酸性防腐剂，它可以被人体的代谢系统吸收而又迅速分解，产生二氧化碳和水，因此山梨酸对人体是无害的。
3.3、 氯化钠在保存液中的作用
氯化钠在溶液中解离成为钠离子和氯离子，其质点数比同浓度的非电解质溶液要高得多。所以氯化钠溶液具有很高的渗透压，对微生物细胞产生强烈的脱水作用，导致微生物细胞发生质壁分离，微生物的生理代谢活动呈抑制状态，使微生物停止生长或死亡，因此氯化钠水溶液具有很强的防腐能力[4]。但氯化钠水溶液的浓度必须达到20%才具有防腐能力。氯化钠溶于水后，解离成的氯离子和钠离子，钠离子与氯离子与周围水分子，形成水化离子。而微生物不能利用水化离子。氯化钠浓度越大，钠离子和氯离子数目越多，吸引的水分子也越多，导致微生物可利用的自由水越少。氯化钠浓度达到26.5%（饱和氯化钠水溶液）时，无论是细菌、酵母还是霉菌都不能生长，因为没有自由水可供微生物利用，这是氯化钠能够防腐的又一个原因。氧气在水中具有一定的溶解度，但在氯化钠水溶液中，氧的溶解度大大下降，从而造成缺氧的环境，这样就使一些需要氧气才能生长的好氧性微生物受到抑制，从而达到防腐的目的。
保存液中氯化钠使用普通食盐即可，完全可以满足要求，而且价格便宜。如果不考虑保存液中其他物质对氯化钠的影响，只考虑水作为溶剂，保存液中的氯化钠浓度已基本达到饱和状态（26.47%）。
4、 结论
无毒无害人体标本保存液保存使用甲醛固定过的人体标本效果良好，完全可以满足人体解剖学教学要求，而且所含成分对人体健康没有损害，配制容易，避免使用昂贵的化学药品，做到价格便宜、易于推广。
参考文献
[1]张瑾.甲醛毒性的研究进展[J].职业与健康,2006(23):2041-2044.
[2]詹亚护,罗媚,龙大宏.改良标本保存液在尸体标本中的应用[J].解剖学研究,2008,30(5):398-399.
[3]杨新东,郑建武,陈忠孝,等.食品防腐防霉剂作尸体标本保存液的应用[J].解剖学杂志,200,318(6):742.
[4]吕凤霞.硫酸钠-过氧化氢-氯化钠加合物的药学及体外杀菌活性研究[D].南京:南京农业大学,2012.
