1. 2. 5 检测步骤
① 从包装铝箔袋中取出检测卡，在 1 h 内使用。
② 将所需检测卡放于平面，与对应样品编号，用吸管吸取清亮待检样品溶液缓慢垂直滴加3 滴无气泡样品于加样孔，开始计时。
③ 反应 3 ~5 min,根据说明书示意图判定结果。
④ 用肉眼观察判断结果。阳性： C 线显红色条带，T 线不显色，判为阳性； 阴性： C 线显红色条带，T 线显红色条带，判为阴性； 无效： C 线不显色，判为无效。
1. 2. 6 检测限 取不同厂家的三个批次（ 分别用 A、B、C 表示） 检测卡对制备的阳性添加猪尿样品（ 低于检测限浓度、检测限浓度、高于检测限浓度） 进行检测。
1. 2. 7 假阴性率试验 取不同厂家的检测卡对50 份分别添加克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇至检测限检浓度的样品进行测定。按照下列公式计算假阴性率： 假阴性率（ %） = 假阴性数/50 ×100.
1. 2. 8 假阳性率试验 取不同厂家的检测卡对50 份不同来源的空白猪尿样品进行测定。按照下列公式计算假阳性率： 假阳性率（ %） = 假阳性数/50 ×100.
1. 2. 9 与仪器方法的比较 取 20 份不同来源猪尿样品，按检测卡说明书和农业部 1025 号公告 -11 - 2008“猪尿中 β - 受体激动剂多残留检测液相色谱 - 串联质谱法”分别进行测定，比较检测结果并计算两种检测方法的符合率。
2 结果与分析
2. 1 检测限
三批检测卡，按照检测步骤，每批分别检测克伦特罗添加样品（ 2.0、3.0、5.0 μg/L） 、莱克多巴胺添加样品（ 3.0、5.0、7.0 μg/L） 、沙丁胺醇添加样品（ 7.0、10.0、12.0 μg/L） 各20 份，结果详见表2.当检测卡的实际检测阈值与标示检测限一致时，该检测卡为合格； 而当实际检阈值高于或低于标示的检测限时，就会导致较高的假阴性率或假阳性率，这样的检测卡是不合格的。由表 2 可见，大多数厂家生产的三联检测卡其实际检测阈值高于标示检测限，并且不仅不同厂家生产的检测卡检测限存在差异，同一厂家不同批号的检测卡检测限的差异也较大。因此建议，每批产品在使用前均需要进行验证。
2. 2 假阴性率
对 50 份分别添加克伦特罗浓度 3. 0 μg/L、莱克多巴胺浓 5. 0 μg/L、沙丁胺醇浓度为 10. 0μg/L 的阳性尿液样品按检测步骤进行检测，结果详见表 3.
由表 3 可见，6 个厂家生产的检测卡都存在一定的假阴性率。1 号厂家假阴性率范围在6% ~ 8% ,2 号为 6% ~ 10% ,3 号为 8% ~ 12% ,4号为 4% ~ 14%,5 号为 2% ~ 4%,6 号为 8% ~12% .说明市售的这 6 个厂家的检测卡在假阴性率这一参数上仍有待提高。
2. 3 假阳性率
对 50 份不同来源的空白尿液样品进行测定，结果见表 4.
由表 4 可见，6 个厂家生产的检测卡都存在一定的假阳性率。1 号厂家假阳性率范围在2% ~ 4% ,2 号为 2% ~ 4% ,3 号为 2% ~ 6% ,4号为 4% ~ 6%,5 号为 2% ~ 4%,6 号为 4% ~8% .假阳性率均控制在 10% 以内，符合国家的相关规定。2. 4 与仪器方法的比较20 份不同来源猪尿样品分别以检测卡和农业部 1025 号公告 -11 -2008“猪尿中 β - 受体激动剂多残留检测液相色谱 - 串联质谱法（ 克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇在猪尿中的定量限为0. 5 μg / L） ”进行测定，以检测卡方法的检测限为阳性判定线，判读结果低于检测限的检测结果用“- ”表示，高于检测限的检测结果用“+ ”表示；仪器检测方法低于 1025 号公告 -11 -2008 方法定量限的检测结果用“- ”表示，高于 1025 号公告 -11 -2008 方法定量限的检测结果用实际结果表示，结果见表 5.
由表 5 可知，当仪器所测样品中克伦特罗、莱克多巴胺或沙丁胺醇的含量明显高于检测卡的检测限时，检测卡均能够检测到阳性样品，如 3 号样品经仪器方法检出含沙丁胺醇为 16. 34 μg/L（ 大于检出限 10 μg/L） 时，6 个厂家的检测卡也均能够检出沙丁胺醇； 当仪器所测样品中克伦特罗、莱克多巴胺或沙丁胺醇的含量明显低于检测卡的检测限时，检测卡并不能够检测到阳性的样品，如17 号样品经仪器方法检出含沙丁胺醇为 8. 99μg/L（ 小于检出限 10 μg/L） 时，6 个厂家的检测卡也未能检出沙丁胺醇； 而当仪器的检测结果值在检测卡的检测限附近时，有些厂家的产品能够检测到阳性的样品，有些厂家的产品则不能检测到阳性的样品。如16 号样品经仪器方法检出含克伦特罗为3.73 μg/L（ 大于检出限 3 μg/L） 时，1、2、3、5号厂家检测卡能够检测出克伦特罗，而 4 号和 6 号厂家检测卡则检不出样品中的克伦特罗。统计并比较两种检测方法的符合率，结果见表 6,可知，1、2 和 3 号厂家三种药物检测结果的符合率介于 75% ~100%之间； 4 号和 6 号厂家三种药物检测结果的符合率介于 75% ~80% 之间；5 号厂家三种药物检测结果的符合率介于 80% ~100% 之间。
3 结论与讨论
根据国家相关规定，检测卡用于筛选方法时，不允许有假阴性，可以有一定的假阳性，但应控制在 10%以内。本试验结果表明： 大多数厂家生产的瘦肉精三联快速检测卡不能够完全与其标示检测限相吻合，实际检测阈值高于标示检测限的情况较为常见，这就容易导致假阴性的出现。
不同生产厂家的瘦肉精三联快速检测卡的质量存在明显差异，其原因可能是由于所用原料纯度、辅料来源、生产工艺的差异，以及保存方式不当导致。鉴于此，建议生产厂家应注意控制原辅料质量和生产工艺稳定性[6 ~8],亦建议保存时注意保存环境，避免因保存不当引起的误差。从质量检测结果来看，各个厂家的检测卡产品均存在不同程度的检测限偏高、假阳性或假阴性的问题，产品质量良莠不齐，也不完全符合国家要求。所以，畜产品加工企业或监管部门在采购瘦肉精快速检测卡时[9],一定要对产品质量进行验证试验，以避免结果误判[10].
以往对于快速检测卡的质量验证试验大多考虑到三个验证参数“检测限、假阴性率、假阳性率”,本试验在考虑以上参数的同时，增加了“与仪器方法比较”这一参数。UPLC - MS/MS 方法可以在定性的基础上准确定量，实验室通常采用这种精准的方法来进行确证。“与仪器方法比较”这一验证参数的选用，不仅能够进一步验证快速检测卡的准确性，而且可以通过比较的方式计算出两者的符合率，进而为生产使用提供可信的依据。
参 考 文 献：
[1] Mersmann H J. Overview of the effects of β - adrenergic recep-tor agonists on animal growth including mechanism of action[J]. J. Anim. Sci. ,1998,76（ 1） : 160 -172.
[2] 中华人民共和国农业部。 动物食品中兽药最高残留限量：第 235 号公告[S]. 2002 -12 -24.
[3] 赵思俊，郑增忍，曲志娜，等。“瘦肉精”的危害及监管检测技术[J]. 中国动物检疫，2011,28（ 4） : 1 -4.
[4] 孙雷，刘琪，张骊，等。 高效液相色谱 - 串联质谱法检测猪尿中 β - 受体激动剂残留的研究[J]. 中国兽药杂志，2008,42（ 4） : 15 - 18.
[5] 农业部 1025 号公告： 11 -2008 猪尿中 β - 受体激动剂多残留检测 液相色谱 - 串联质谱法[S]. 2008 -04 -29.
[6] 张改平，王选年，肖肖。 瘦肉精的毒害作用及其试纸快速检测技术[J]. 中国动物检疫，2011,28（ 5） : 1 -6.
[7] 陈小旋。 盐酸克伦特罗单克隆抗体制备及其免疫层次试纸条的研制[D]. 福州： 福建林业大学，2005.
