河豚毒素 (Tetrodotoxin,TTX)是一种毒性很强的海洋生物活性物质,为典型的神经 Na+通道阻断剂,该毒素经腹腔注射对小鼠的 LD50为 8μg/kg,曾一度被认为是自然界毒性最强的非蛋白类毒素。TTX在有机酸条件下理化性质比较稳定,经日晒、盐腌和烹调加工毒性无明显变化。如对含TTX高的海产品加工处理不当,还会引起食物中毒及致残、致死事故,严重威胁人们的生命安全。研究发现 TTX不仅存在于豚科鱼类中,在贝类、蟹类、章鱼、蝾螈和线虫等生物体内也发现了河豚毒素。我国沿海地区因食用海水产品而发生 TTX中毒事件时有发生,除河豚鱼中毒外,织纹螺中毒、烤鱼片中毒也与 TTX有关。为此对宁波市场销售的主要鲜活海产品 TTX含量及变化规律进行研究,并进行风险评估。
1、 对象与方法
1．?1 对象 选取宁波市 6个区 28个菜市场和超市作为监测点,每月抽取当月市民消费量较大的鲜活海产品,测定 TTX含量,以分析海产品 TTX阳性检出率和含量的季节变化、区域特点、种群规律,并进行食品安全风险评估。
1．?2 方法 TTX检测采用间接竞争定量酶联免疫(ELISA)检测方法,试剂盒 (ELISA-kitforTTX)由中国疾病预防控制中心营养与食品安全所和北京中卫食品卫生科技公司联合生产,每批随机抽取 5份样品留样进行 LC-FLD和 LC-MS方法验证。
1．?3 风险评估 参照目前河豚鱼 TTX含量通用评价标准:低于 10mU/g为无毒、低于100mU/g为弱毒、低于1000mU/g为强毒、大于1000mU/g为剧毒。本研究认同海产品可食部分 TTX含量不超过 10mU/g者为安全。检测结果均采用单项质量指数法进行安全评估。
1．?4 统计分析 检测结果运用 Excel软件进行数据汇总和表格制作,利用 SPSS软件进行统计分析。
2、 结 果
2．?1 海产品 TTX阳性率 采用 LC-FLD和 LC-MS方法验证,验证结果符合率为 90?00% (54/60)。在检测的 1055份海产品中,TTX平均含量为 10?46μg/kg,含量最高的达 275?00μg/kg,但P25、P50和 P75均低于检出限 (5μg/kg),其中TTX含量 >10mU/kg的海产品 213份,TTX阳性率为 20?19%,其 TTX浓度范围为 10?00~275?00μg/kg,TTX平均含量为51?81μg/kg,P25为25?25μg/kg,P50为 36?25μg/kg,P75为63?20μg/kg。
2．?1．?1 不同月份海产品 TTX阳性率 1—12月份海产品 TTX阳性检出率为 7?14% ~35?56%,全年TTX阳 性 率 1月 份 34?07% (31/91)、2月 份35?56% (32/90)、6月份 7?14% (6/84)和 12月份 33?33% (27/81)呈现两头高、中间低的走势。
2．1．?2 不同类别海产品 TTX阳性率 所抽样的 5类海产品 TTX阳性率为 7?32% ~45?45%。其中以贝类阳性率最高,达 45?45% (110/242);其次为海蟹,阳性率为 28?31% (47/166);头足类、海水鱼类和海虾类三者阳性率较为接近,分别为7?32% (9/123)、8?73% (33/378) 和 9?59%(14/146)。不同种类的海产品 TTX阳性率差异有统计学意义 (χ2=156?30,P<0?01)。
2．?2 海产品 TTX含量
2．?2．?1 不同月份海产品 TTX含量 1—12月份抽检的海产品 TTX平均含量为 1?64~21?32μg/kg,走势与海产品 TTX阳性率走势非常一致。采用多个独立样本非参数检验,说明不同月份海产品 TTX平均含量差异有统计学意义 (Kruskal-WallisH检验 H=85?54,P<0?01),见表 1。
2．2．2 不同种类海产品 TTX含量 5类海产品全年 TTX含量平均值为 3?46~25?04μg/kg。5类海产品中的 TTX含量,经多个独立样本非参数检验(Kruskal-WallisH检验),差异有统计学意义 (H=153?91,P<0?01),见表 2。
2．?3 Logistic回归分析 将采集海产品的月份、海产品种类和海产品销售区域与海产品 TTX阳性率作多因素 Logistic回归分析,入选的因子有采集的月份和海产品种类,而采集的销售区域未入选。以 6月份为参考,海产品 TTX阳性风险2月份最高 (OR=14?315),其后依次为 12月份 (OR=13?024)、1月份 (OR=12?625)、3月份 (OR=11?018)、11月份(OR=8?020),8月份 (OR=3?189)和 10月份(OR=3?032),其余月份 TTX阳性率与 6月份差异无统计学意义。以头足类为参考,贝类 TTX阳性风险最高 (OR=16?846),海蟹类次之 (OR=5?498),而海水鱼类、海虾类、头足类三者之间风险差别不大,见表3。
2．?4 风险评估 全年抽检海产品 TTX毒力均值为评价标准的 0?48%,最大毒力为评价标准的12?50%。运用单项质量指数法评价,不同类别、不同季节和不同区域海产品 TTX含量平均值和最大检测值进行质量评价,表明宁波市售鲜活水产所含 TTX量远远低于安全限值。
3、 讨 论
TTX是典型的神经 Na+通道阻断剂,TTX通过与钠离子通道受体结合,阻断电压依赖性钠通道,从而阻滞动作电位,导致与之相关的生理活动障碍,主要是神经肌肉麻痹。毒素作用于脑干、运动神经、感觉神经和植物神经系统而引起中枢神经、肌肉神经、心血管和胃肠道功能障碍等临床特征。目前,对于 TTX中毒尚无特效解毒剂,临床上一般根据发病症状进行对症治疗。
目前建立的 TTX检测方法有生物检测法、物化检测法、免疫学检测法。免疫学检测法具有操作简便、快捷等优点,费用不昂贵,且检出限低、灵敏度高、专一性高,唯一限制其应用的方面是抗体制备比较困难。近年单克隆抗体技术已经日渐成熟,免疫学检测法也逐渐得以普及。
我国目前对海产品 TTX研究主要集中在河豚鱼及其组织、织纹螺、引起食物中毒的鱼片等。张风雷等对深圳大鹏湾海域河豚鱼毒性进行了深入调查,刘智禹对南海采集的河豚鱼进行了品种鉴别,并采用直接竞争酶联免疫法研究了河豚鱼的毒性,徐景野等、罗璇等、于仁成等分别在织纹螺中检出 TTX。马群飞等、陈人强等在分析海产品食物中毒事件中检出 TTX。
本次检测结果显示:宁波市售鲜活海产品 TTX阳性率较高,但浓度不高;TTX阳性率、含量有季节差异和种群差异,但销售区域之间差异不明显。
本研究发现海产品 TTX阳性风险 1—3月份和 11—12月份高于其他月份,而且贝类 TTX中毒风险最大。国内对海产品中 TTX消长及变动规律还缺乏系统的研究和调查,而对织纹螺的研究,有学者对近二十年来浙江舟山市食用织纹螺中毒的事件进行了总结和统计,提出中毒事件的发生存在一定的周期性和季节性特征,中毒事件高发期间隔 1~4年,每年的 6—8月份为中毒事件发生的高峰期,也有学者对浙江宁波的织纹螺毒性进行了 10多年的跟踪调查,但却没有发现明显的毒性变化规律,毒性变动难以预测。所以本研究只是对一个监测年度海产品中 TTX含量进行预测,要外推到其他年度海产品 TTX变化规律,还远远不够。
虽然所抽检的海产品未发现 TTX毒力超过安全范围的,但是也不排除特殊环境下,海产品尤其是贝类受 TTX污染严重,使得 TTX含量大幅上升,超过安全限值。同一海产品中往往有多种毒素存在,通过联合协同作用,增加了食物中毒的风险。或同一时间内食用多种含 TTX较高的海产品,也增加了 TTX中毒的风险。
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