多潘立酮( Domperidone) 为第二代胃肠动力药，为苯并咪唑类外周 D2受体拮抗剂，有促进胃动力和止吐作用，使胃排空速率加快，并抑制各种原因所致的恶心、呕吐。有关物质的控制，一直是化学药物质量控制的关键，有关多潘立酮有关物质的测定的报道也比较多，但是有关物质测定过程中多潘立酮的供试品浓度选择存在一定的差异性，报道中曾采用相当于多潘立酮 0． 2、0． 25 mg/mL，而中国药典增补版中采用的多潘立酮的浓度为 0． 5 mg/mL。本研究采用高效液相色谱法进行多潘立酮有关物质的测定，通过测定不同浓度的多潘立酮有关物质，进而考察浓度对于有关物质测定的影响。
1 仪器与试药
日本岛津 LC-20A 系列高效液相色谱仪，包括在线真空脱气装置、二元梯度泵、自动进样器、二极阵列管检测器和 LC-Solution 色谱工作站; CPA225D 电子天平( 赛多利斯) ; MILLIPORE( Synergy185) 超纯水制备仪; KQ-250DE 型数控超声波清洗器。
甲醇为色谱纯，水为超纯化水，其他试剂为分析纯; 多潘立酮( 100304-200502 中国药品生物制品检定所) ，氟哌利多( EDQM D3100000，16/12/2009) ; 多潘立酮片( 本实验室自制) 。
2 方法与结果
2． 1 色谱条件与系统适应性试验
色谱柱: 岛津 wondaSilTM，C18色谱柱( 4． 6 mm ×250 mm，5 μm) ; 流动相: 甲醇∶ 0． 5% 醋酸铵水溶液( 67∶ 33) ，检测波长为 280 nm，柱温 30 ℃。多潘立酮和氟哌利多的分离度应大于 2． 0。
2． 2 溶液的制备
取本品的细粉适量，分别配置多潘立酮浓度为5、2． 5、1． 25、0． 9、0． 7、0． 5、0． 2 mg / mL 的溶液，作为供试品溶液; 分别精密量取各供试品溶液 1 mL，置200 mL 量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液; 取多潘立酮对照品 10 mg，氟哌利多对照品15 mg，精密称定，置 100 mL 量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为系统适应性溶液。
2． 3 专属性实验
多潘立酮片为西安杨森制药有限公司在国内首家生产并销售，其公布的说明书中包含有所使用的辅料信息为: 淀粉、氢化植物油、乳糖、硬脂酸镁、微晶纤维素、聚维酮 K90、预交化淀粉、十二烷基硫酸钠。本实验室进行多潘立酮片的处方优化，最后选定的辅料为: 淀粉、乳糖、硬脂酸镁、微晶纤维素、聚维酮 K30、十二烷基硫酸钠。
通过破坏性试验研究，本实验的色谱条件可以对各种破坏条件下产生的杂质进行有效的测定，同时辅料的破坏性试验也表明，辅料对于本制剂的有关物质测定没有影响，系统适应性实验符合要求。
2． 4 有关物质的测定
2． 4． 1 进样体积的影响
取浓度为 5 mg/mL 的供试品及其自身对照溶液，采用自动进样器进样，进样体积分别为 5、10、20、30 μL，注入液相色谱仪，记录主成分峰保留时间 2 倍的色谱图。不同进样体积的样品在不同的保留时间出现不同的杂质，经过数据处理，共有 10 个杂质峰被检出，有关物质含量见表 1，变化趋势图见图 1。由实验结果可知，随着进样体积的增加，有关物质的含量也有所增加，但是增加的幅度不是很大，在进样量20、30 μL 时，有关物质的百分含量差异不是特别明显。同时对比不同进样体积下的不同色谱峰可以发现，进样体积增加后，有关物质明显增加的色谱峰为相对保留时间 0． 372、1． 133 的色谱峰，其增加的百分率分别为 198． 32% 和 99． 68%。可见随着进样量的增加主要增加的有关物质为以上 2 个色谱峰。
2． 4． 2 浓度对有关物质的影响
精密量取浓度为 5、2． 5、1． 25、0． 9、0． 7、0． 5、0． 2 mg / mL的溶液及其自身对照溶液 20 μL，注入液相色谱仪，记录主成分峰保留时间 2 倍的色谱图。经过数据处理后，各个浓度项下的有关物质情况见表2，有关物质检查结果分布见图 2。由实验结果可知，当多潘立酮的浓度为 2． 5、5． 0 mg/mL 时出现杂质峰9 个，为所有浓度中出现杂质峰数最多的，同时从趋势图上可以看出，不同浓度的多潘立酮对于有关物质的测定影响不是非常明显，在本研究所选定的浓度范围内，2． 5 mg/mL 为杂质峰检测数量最多的一个浓度点，可以作为多潘立酮有关物质检查的参考依据。【1-2】
3 讨 论
有关物质检查过程中，分别采用不同的进样体积和不同的进样浓度进行考察，其实质均是改变单次进样量的考察。高效液相色谱仪可以提供不同的进样体积，最大可以达到 2 000 μL 的进样量，但是过高的进样量会给色谱柱产生较大的负荷，所以寻求合适的进样量、还能满足测定的需要尤为关键。本研究分别采用 5、10、20、30 μL 作为进样体积，常规检测的进样体积一般为 10 μL 和 20 μL，其他体积采用的相对比较少，从实验结果也可以看出，20 μL 和 30 μL 的进样体积在检测结果上没有明显的差异，所以没有再进行 30 μL 以上体积的检测，20 μL 的检测体积能够满足检测的需要。
数据处理过程中发现，在相对保留时间为 0． 170的位置，有一色谱峰，其峰面积并不随着进样体积和进样浓度的改变而发生明显变化，单独进行溶剂检测后也发现这一色谱峰的存在，所以在数据处理过程中舍弃本研究判定的溶剂峰。
供试品溶液的浓度过高，也就是说进样量过大，会造成主峰严重拖尾、裂缝、柱超载等问题，如果设定过低则会出现灵敏度低，有关物质无法检测到的现象。从本研究也可以发现，当检测浓度比较低的条件下，检测出的杂质峰相对比较少，本研究采用了最高的浓度为 5． 0 mg/mL，这个浓度与 BP2010 中多潘立酮片的有关浓度检查供试品溶液的浓度是一致的，但是色谱系统上存在较大的差异，所以检测结果的对比上还需要进一步的研究。
本研究考察了不同的浓度对有关物质的影响，所检测结果均小于 1． 0%，但是不同的进样量检查的结果还是有很大的差异。然而这些在 1． 0% 范围内的差异并不能证明浓度越高就是最优检测条件的选择依据，还需要进一步确认增加幅度比较大的几个色谱峰的结构确认，以及进一步的药理毒理学方面的研究，最终确定每一个杂质对制剂的影响，为制剂的安全评价和质量控制提供理论依据。
参考文献:
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