油菜籽粕生物碱对离体回肠肠管平滑肌收缩功能的作用

　　油菜籽粕为油菜籽榨油后的副产物。我国的油菜种植面积和油菜籽产量均居世界第一位，油菜籽粕资源十分丰富，每年产量千万吨左右，居世界首位，但油菜籽粕的资源利用却相当有限，基本当做肥料或按少量比例添加作反刍动物和淡水鱼养殖饲料。目前对油菜籽粕中营养成分的研究主要集中于其中干物质、粗蛋白、粗脂肪、无氮浸出物、粗纤维、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维、粗灰分、钙、硒、锰、磷，尚未见到有关油菜籽粕生物碱生物学功能的报道。本研究旨在观察油菜籽粕生物碱对离体回肠肠管平滑肌收缩功能的影响并探讨机制，为油菜籽粕功能性食品或药品开发提供实验依据。

　　1 材料与方法

　　1． 1 材料
　　①实验动物: 成年健康新西兰长耳白兔，体质量 2． 0 ～2． 5 kg，雌雄兼用，辽宁省大连市大连医科大学医学实验动物中心提供，SCXK( 辽)2013-0003。②主要仪器及试剂 : Medlab-U /4C501H生物信号采集处理系统( 南京美易科技有限公司) 。

　　BP 211D 型电子天平( 德国赛多利斯制造) ，恒温平滑肌浴槽( 张家港市南港医疗器械厂) ，FT-100 生物张力传感器( 成都泰盟电子有限公司) 。硫酸阿托品注射液( 郑州羚锐制药股份有限公司，批号:1005051) ，氯 化 钠 ( 青 岛 化 学 试 剂 厂，批 号:050616 ) ，氯化钾 ( 河南焦作市化工三厂，批号:990911) ，无水氯化钙( 天津市广成化学试剂有限公司，批号: 20020504) ，碳酸氢钠( 山东省化工研究院，批号: 990902) ，葡萄糖( 青岛化学试剂厂，批号:040716) ，MgSO4·7H2O ( 开 原化学试剂厂，批号:990201) ，NaH2PO4·2H2O( 天津市科密欧化学试剂开发中心，批号: 030828) ，皆为分析纯。油菜籽粕生物碱为本实验室自制。

　　1． 2 家兔离体回肠肠管的制备 取禁食 24 h 家兔 15 只，槌击后枕部致死，迅速剖开腹腔，分离回肠，去除肠壁周围肠系膜，分离出长约 30 cm 的肠管，立刻置于 37 ℃ 充入 95% O2和 5% CO2的混合气体的台氏液中，肠管出现明显蠕动时剪成 2 cm 的肠段，用台氏液将肠内容物冲洗干净后备用。

　　1． 3 油菜籽粕生物碱对离体回肠平滑肌收缩频率及张力的影响观察 参照文献方法，取 1． 2 制备的离体肠管，上端接肌张力换能器，下端固定于金属钩上，将固定好的肠管置于充满 20 mL 台氏液( 37 ±0． 5) ℃ 的麦氏浴槽中，用 Medlab-U /4C501 生物信号采集处理系统记录肌张力变化，调整标本初负荷为2． 0 g，肠管蠕动平稳 30 min 后开始试验。每次筛选13 个舒缩频率、张力稳定的肠管进行实验，向 13 个麦氏浴槽中分别加入 0、0． 5、1、2、4、6、8、10、20、40、60、80、100 μg / μL 油菜籽粕生物碱溶液，每个浓度的给药体积为5 μL，每个浓度重复 15 次实验，以0 μg/μL油菜籽粕生物碱作为空白对照，用 MedLab 生物信号采集处理系统软件记录并分析肠管的的蠕动曲线，用周期测量法测定给药后蠕动波的频率，用区间测量法测量给药后的张力。

　　1． 4 油菜籽粕生物碱联合阿托品对离体回肠管平滑肌舒缩功能的影响观察 参照文献方法，制备 4 条离体肠管，待标本舒缩平衡后，分别采用下述 4 种给药顺序观察油菜籽粕生物碱对阿托品所致回肠舒张的影响: ①1%油菜籽粕生物碱→1% 阿托品( 图 A) ;②1%阿托品→1% 油菜籽粕生物碱( 图 B) ; ③1% 油菜籽粕生物碱→1%阿托品→1%油菜籽粕生物碱( 图C) ; ④10% 阿托品→1% 油菜籽粕生物碱→10% 阿托品( 图 D) 。每次实验给药量为5 μL。

　　1． 5 统计学方法 采用 SPSS16． 0 软件。计量资料以珋x ± s 表示，组内比较用方差分析。P≤0． 05 为差异有统计学意义。

　　2 结果

　　2． 1 油菜籽粕生物碱对离体回肠平滑肌收缩频率及

　　张力的影响 0、0．5、1、2、4、6、8、10、20、40、60、80、100μg/μL 油菜籽粕生物碱作用后兔离体肠平滑肌收缩频率 分 别 为 ( 0． 249 3 ± 0． 014 4) 、( 0． 251 3 ±0． 015 0) 、( 0． 242 7 ± 0． 019 4) 、( 0． 248 1 ± 0． 012 8) 、( 0．255 8 ±0．032 0) 、( 0． 247 1 ±0． 012 1) 、( 0． 245 0± 0． 045 8 ) 、( 0． 243 3 ± 0． 008 2 ) 、( 0． 260 0 ±0． 009 3) 、( 0． 252 7 ± 0． 015 3) 、( 0． 248 0 ± 0． 012 1) 、( 0．246 7 ±0． 010 5) 、( 0． 249 4 ±0． 007 7) 次/s，张力分别为( 2． 036 4 ± 0． 031 3) 、( 2． 060 0 ± 0． 041 8) 、( 2．061 3 ±0．049 1) 、( 2． 078 7 ±0． 022 3) 、( 2． 093 3± 0． 024 8 ) 、( 2． 155 3 ± 0． 054 0 ) 、( 2． 183 8 ±0． 024 0) 、( 2． 290 0 ± 0． 120 8) 、( 2． 333 6 ± 0． 120 2) 、( 2．471 5 ±0．227 3) 、( 2． 241 3 ±0． 109 2) 、( 2． 084 7± 0． 053 3) 、( 2． 095 0 ± 0． 035 7) g，不同浓度油菜籽粕生物碱作用后兔离体肠平滑肌收缩频率比较，P 均＞ 0． 05; 6、8、10、20、40、60 μg / μL油菜籽粕生物碱作用后兔离体肠平滑肌张力与 0 μg/μL 油菜籽粕生物碱比较，P 均 ＜0．05。

　　2． 2 油菜籽粕生物碱联合阿托品对回肠肠管平滑

　　肌舒缩功能的影响 油菜籽粕生物碱兴奋肠管的作用可以部分被阿托品阻断( 图 1A) ; 油菜籽粕生物碱可以拮抗阿托品所致的肠管舒张( 图1B) ; 阿托品抑制油菜籽粕生物碱兴奋肠管的作用可以被再次加入的油菜籽粕生物碱所逆转( 图 1C) 。采用封闭 M受体剂量的阿托品( 10%) ，肠管呈现完全松弛状态，而 1%的油菜籽粕生物碱可以部分拮抗阿托品所致的肠管舒张，且这种拮抗作用不会被再次加10% 阿托品逆转( 图 1D) 。【图1 】

　　
　　3 讨论

　　油菜籽粕是以油菜籽为原料经过取油后的副产物，呈淡灰褐色。为将其开发成为功能性食品和药品，本研究开展了油菜籽粕生物碱对家兔离体肠平滑肌收缩功能的研究，结果发现油菜籽粕生物碱的作用性质是兴奋离体肠管，且这种作用在 0． 5 ～40 μg / μL 之间存在着明显的量效关系，在此浓度范围内随着油菜籽粕生物碱浓度的增大，回肠收缩张力增大，超出该范围( 40 ～ 100 μg/μL) 则出现随着油菜籽粕生物碱浓度增高张力反而下降的趋势。说明油菜籽粕生物碱兴奋肠管的作用存在着高剂量翻转现象。为进一步探究油菜籽粕生物碱兴奋离体肠管的作用机制本研究采用 M 胆碱受体配体结合实验，考察油菜籽粕生物碱是否是通过 M 受体通路兴奋肠管平滑肌。图 1A、B 显示油菜籽粕生物碱兴奋肠管的作用可以部分被 M 受体阻断剂阿托品阻断且油菜籽粕生物碱可以拮抗 M 受体阻断剂阿托品所致的肠管舒张，也就是说 M 胆碱受体途径参与了油菜籽粕生物碱兴奋肠管的作用。图 1C 显示阿托品抑制油菜籽粕生物碱兴奋肠管的作用可以被再次加入的油菜籽粕生物碱所逆转，这种现象的出现有两种推测，一是油菜籽粕生物碱除了可以激动M 受体外，还可能通过其他通路实现提高离体肠管张力的作用，二是油菜籽粕生物碱与阿托品之间存在着竞争 M 受体的作用，阿托品剂量低不足以封闭所有肠管上的 M 受体。针对上述假设本研究采用大剂量阿托品( 10%) 孵育离体肠管，当阿托品完全阻断 M 受体后再加入油菜籽粕生物碱( 图 1D) ，结果显示大剂量阿托品使肠管呈现完全松弛状态，但并不能完全阻断的油菜籽粕生物碱对肠管的兴奋作用，且这种兴奋作用不会被再次加大剂量阿托品所竞争性减弱，结合图 1C、D 说明阿托品的确与油菜籽粕生物碱存在竞争 M 受体的作用，但除了 M 胆碱受体途径外，还有其他途径参与了油菜籽粕对肠管的兴奋作用，但究竟还有哪些途径参与了油菜籽粕兴奋离体肠管，仍需要进一步探索。

　　综上所述，油菜籽粕生物碱对家兔离体肠管平滑肌具有兴奋作用，其兴奋肠管的作用与激动 M 受体有关。

　　参考文献:

　　［1］左青，张新雄． 我国油菜籽种植和加工现状［J］． 中国油脂，2010，35( 5) : 1-3．
　　［2］吴谋成，袁俊华，邵锦华，等． 油菜籽的综合加工和利用研究［J〗］． 华中农业大学学报，1999，18( 6) : 589-591．
　　［3］朱文优． 菜籽粕的营养价值与毒性［J］． 江西饲料，2009，( 增刊) : 10-12．
　　［4］袁明勇，马松涛，刘冬恋，等． 桂枝油对兔离体肠平滑肌的运动作用机制［J］． 中国医院药学杂志，2011，31( 17) : 1482-1483．
　　［5］李仪奎． 中药药理实验方法学［M］． 2 版． 上海: 上海科学技术出版社，2006: 463．
　　［6］徐志立，林原，张厚利，等． 黄芩苷对大鼠离体小肠及胃平滑肌条收缩性的影响［J］． 时珍国医国药，2008，19( 10) : 2323-2324．
　　［7］张均田，杜冠华． 现代药理实验方法［M］． 北京: 中国协和医科大学出版社，2012: 556-557．
　　［8］韩坚，陈孝健． 离体肠管实验的研究概况［J］． 中医药导报，2008，14( 3) : 94-97．
　　［9］马晓燕，王建，肖武，等． 远志、厚朴及其不同配比对家兔离体肠平滑肌的影响［J］． 中药药理与临床，2011，27( 3) : 90-93．
　　［10］张佳，邵正威，高雅，等． 槲皮素对兔离体肠平滑肌的舒张作用及其机制［J］． 中国应用生理学杂志，2013，9( 2) : 162-165．