云斑裸颊虾虎鱼( Yongeichthys criniger) 为暖水性沿岸小型有毒鱼类，生活于咸淡水水域底部，游动较少，以底栖动物、虾、有机碎屑等为食。体长80 ～120 mm，大者可达180 mm。日本、新加坡、我国海南与台湾等地均有分布。由于与大弹涂鱼( Boleophthalmus pectinirosris，俗称“跳跳鱼”) 外形相似，在我国广东多地常被误食，已发生多起食用云斑裸颊虾虎鱼中毒致死的事件。
如2007 年3 月，湛江市徐闻县西连镇发生食用云斑裸颊虾虎鱼，致 16 人中毒，1 人死亡。2013年 3 月 14 日至 15 日，雷州市英利镇、东方红农场、幸福农场等地共 22 人因食用有毒虾虎鱼中毒。在 20 世纪 70 年代已有一些日本学者进行过虾虎鱼毒性的研究。在日本和中国台湾地区采集的云斑裸颊虾虎鱼体内均已检出含有河鲀毒素( tetrodotoxin，TTX)，但关于中国大陆云斑裸颊虾虎鱼体内河鲀毒素分布与含量尚无报道。2013 年 4 月，作者在发生食用云斑裸颊虾虎鱼中毒事件的广东省湛江市徐闻县西连镇，采集了当地人指认误食的云斑裸颊虾虎鱼，通过形态学鉴定种类，并利用酶联免疫法( enzyme linkedimmunosorbent assay，ELISA) 检测不同组织河鲀毒素含量。同时，与野生暗纹东方鲀( Takifugufasciatus) 相应组织的毒性强弱进行了比较。
1、 材料与方法
1． 1 样本采集
虾虎鱼样品于 2013 年 4 月 26 日采集于广东湛江市徐闻县西连镇，充氧活体运回上海海洋大学实验室，随机选取 7 尾，分离皮肤、眼睛、肌肉、肝脏、卵巢组织。野生暗纹东方鲀样品 1 尾于2013 年 4 月 29 日采集于上海芦潮港。
1． 2 种类的形态鉴定
根据虾虎鱼的斑纹、体色、鳍等形态特征，参考《中国动物志———硬骨鱼纲鲈形目( 五) 虾虎鱼亚目》鉴定种类。
1． 3 酶联免疫法( ELISA) 定量检测不同组织中的 TTX
河鲀毒素的提取参考文献［8］。不同组织称重( 暗纹东方鲀由于性腺无法分辨雌雄，故没有提取) ，剪碎，研磨，加入 0． 1% 乙酸搅拌，在水浴上不断搅拌煮沸 10 min，冷却后过滤，用 0． 1% 乙酸溶液洗残渣，合并滤液定容至 10 mL。为使ELISA 的测试值位于标准浓度范围内，对粗毒素提取液进行稀释 5 倍处理。将稀释后的样品 pH调至6． 5 ～7． 4，定容至10 mL，利用河鲀毒素定量酶联免疫检测试剂盒( 北京中卫食品卫生科技公司) 进行 ELISA 检测。检测步骤如下: 用洗液洗涤微孔板 3 min，重复洗涤 1 次，记录样品及标准品的位置。加入 50 μL 样品及 TTX 标准品( 北京中卫食品卫生科技公司) 至微孔，然后加入 50 μL抗河豚毒素单克隆抗体溶液至样品及标准品中，37 ℃ 孵育 90 min。在吸水纸上拍打甩掉孔中液体，洗液洗涤微孔板3 min，再重复洗涤2 次，在吸水纸上拍打以除尽孔中液体。每孔加入酶标物100 μL，37 ℃ 孵育 60 min。洗液洗涤微孔板 3min，再重复洗涤 4 次，在吸水纸上拍打完全除去孔中液体。每孔加入显色液 100 μL，37 ℃ 孵育12 min 后，每孔加入终止液 50 μL，立即用酶标仪在波长 450 nm 处测定吸光度值( OD 值) 。
TTX 含量按下式进行计算:T = ( C × K) / B ( 1)式中: T 为 TTX 含量( μg/kg) ; C 为测定液中 TTX浓度( ng/mL) ; K 为提取液的稀释倍数; B 为组织液浓度( g/mL) 。
2、 结果与分析
2． 1 物种鉴定
经形态学鉴定，样品体侧正中有黑色大斑纹，背侧鞍状黑斑 2 ～3 个，以第一背鳍基底后方的最大且明显，体侧有3 至4 个，最后一个黑斑在尾鳍基部( 图版 －1) ; 项部有 2 条暗褐色宽横条，有一暗色长斑连接眼至上颌( 图版 － 2) ; 头部无鳞、项部延伸至背鳍前段亦无鳞( 图版 － 3) ; 2 个背鳍，第一背鳍为 6 鳍棘; 第二背鳍 1 鳍棘，9 鳍条。臀鳍与第二背鳍位置相对，为 1 鳍棘，9 鳍条( 图版 － 4) ; 胸部、胸鳍基部以及腹部被小圆鳞( 图版 －5) ; 上下颌等长，唇略厚; 舌发达，游离;两颌齿多行，排列稀疏，并且外行齿扩大，下颌中央结合处无犬齿。符合《中国动物志———硬骨鱼纲鲈形目( 五) 虾虎鱼亚目》裸颊虾虎鱼属特征，并且本属产于中国仅 1 种，即云斑裸颊虾虎鱼。
2． 2 各组织的 TTX 含量比较
以各标准溶液 OD 值与标准 1( 浓度0 ng/mLTTX 标准溶液) 的 OD 值的比值为纵坐标( 即标准品 OD 比) ，所对应标准溶液浓度( ng/mL) 的对数值为横坐标，制作如图 1 所示的标准曲线。根据样品 OD 值与标准 1 的 OD 的比值( 即样品 OD比) ，通过标准曲线公式得到对应点的横坐标，即为 TTX 浓度的对数值，求得反对数即为测定液中TTX 浓度 C( ng / mL) 。
云斑裸颊虾虎鱼和暗纹东方鲀各组织的TTX 含量见表 1，云斑裸颊虾虎鱼每千克组织含TTX 量从高到低依次为肝脏 69． 954 mg、卵巢9． 510 mg、皮肤 8． 937 mg、肌肉 5． 181 mg、眼睛3． 321 mg，而暗纹东方鲀相应组织的 TTX 含量均比云斑裸颊虾虎鱼低，其每千克组织含 TTX 量从高到低依次为肝脏 7． 86 mg、皮肤 0． 72 mg、眼睛0． 23 mg、肌肉仅为 0． 13 mg。
3、 讨论
通过形态学的鉴定，比对各部分特征，此次采集的样品为裸颊虾虎鱼属云斑裸颊虾虎鱼，其体侧大块黑色斑纹，为其显著特征，并且通过第一背鳍可迅速区分与云斑裸颊虾虎鱼容易混淆的无毒大弹涂鱼: 云斑裸颊虾虎鱼第一背鳍为 6鳍棘，第二背鳍为1 鳍棘9 鳍条; 大弹涂鱼第一背鳍只有 5 鳍棘，鳍棘呈丝状延长且背鳍高，第二背鳍低，1 鳍棘 22 ～29 鳍条。
本研究显示云斑裸颊虾虎鱼各组织毒性以肝脏最强，其次为卵巢、皮肤、肌肉、眼睛。单位组织毒性含量，云斑裸颊虾虎鱼肝脏毒性是暗纹东方鲀肝脏的 9 倍左右，其皮肤毒性超过暗纹东方鲀 12 倍，肌肉接近于 39 倍，眼睛超过 14 倍，比野生暗纹东方鲀相应组织的 TTX 含量均要高。
通过与东方鲀属和腹刺鲀属的河鲀毒素 ELISA的检测数据对比，云斑裸颊虾虎鱼肝脏含毒量均高于月腹刺鲀( Gastrophysus lunaris) 、横纹东方鲀( Takifugu oblongus) 、黄鳍东方鲀( Takifuguxanthopterus) 、紫色东方鲀( Takifugu Porphyreus) 、红鳍东方鲀( Takifugu rubripes) ; 肌肉毒性高于横纹东方鲀、黄鳍东方鲀，低于月腹刺鲀; 皮肤毒性高于横纹东方鲀、黄鳍东方鲀、棕斑腹刺鲀，低于月腹刺鲀。可能由于季节的变化，鱼体内所含毒量也会发生改变，需要更为深入的研究，以更准确比较各种有毒鱼类之间、组织与组织之间的含毒量高低。但云斑裸颊虾虎鱼的 TTX 含量之高，应给予高度重视，尤其肌肉和皮肤均含有相当高含量的 TTX，一旦当作大弹涂鱼误食，极易造成严重的中毒事件，建议在云斑裸颊虾虎分布的海南、广东等地进行相关宣传，防止此类事件的再次发生。
目前对于云斑裸颊虾虎鱼体内河鲀毒素的来源尚不清楚，而河鲀体内的河鲀毒素被普遍认为是来自食物链或体内共生的细菌。云斑裸颊虾虎鱼体内河鲀毒素有猜测可能来自食物链中的塔玛亚历山大藻( Alexandrium tamarense) ，塔玛亚历山大藻确实既能产生麻痹性贝类毒素，又能产生河鲀毒素，但也不能排除其体内的河鲀毒素来自共生的细菌的可能。已有各种产河鲀毒素的细菌从有毒的河鲀体内被分离出来。云斑裸颊虾虎鱼毒素的来源，还需进一步的研究认证。
感谢广东省湛江市陈世硕、柯耿协助采集云斑裸颊虾虎鱼样品! 感谢上海海洋大学伍汉霖研究员在鱼类鉴定方面的指导!
参考文献:
［1］ 伍汉霖，钟俊生． 中国动物志: 硬骨鱼纲． 鲈形目． 虾虎鱼亚目［M］． 北京: 科学出版社，2008．
［2］ 杨霞． 因进食有毒海鱼，湛江 16 人中毒 1 人死亡［EB/OL］．
［3］ 陈杨，粤食安． 毒倒 22 人，肇事的并非“跳跳鱼”经初步判断，祸起云斑裸颊虾虎鱼［N］． 新快报，2013 － 03 － 20( A32) ．
