学术堂首页 | 文献求助论文范文 | 论文题目 | 参考文献 | 开题报告 | 论文格式 | 摘要提纲 | 论文致谢 | 论文查重 | 论文答辩 | 论文发表 | 期刊杂志 | 论文写作 | 论文PPT
学术堂专业论文学习平台您当前的位置:学术堂 > 化学论文 > 有机化学论文

巨型脂质体制备与收集的微流控芯片探析

来源:学术堂 作者:周老师
发布于:2015-08-17 共3833字
摘要

  1 引 言

  巨型脂质体为粒径大于 1 #m 的脂质体[1],由于其尺寸巨大,在光学显微镜下易于观察和操控; 膜结构类似细胞膜,可模拟细胞膜或细胞; 具有双亲性,可以包载水溶性和脂溶性物质。它可用作细胞膜或细胞模型来研究其物理性质等[2 ~5]; 模拟细胞环境,进行蛋白质表达或者细胞功能等研究[6 ~8]; 用于运载蛋白质、DNA 等,研究基因转移、药物传送等[9]; 作为生化反应器,提供超小反应体积等[10].因此,这一脂质结构可应用于分子生物学、细胞生物学、生物化学、医药等多个领域。

  微米级巨型脂质体成型能力和稳定性都较纳米级常规脂质体差,因而更难制备。现有制备方法主要包括温和水合法、溶剂蒸发法、微流控注入法、电形成法[11,12].相较而言,电形成法通过电场作用实现巨型脂质体的制备,具有速度快、可控性高、反应条件温和、环境污染小等优点,得到了越来越多关注[13].但是,电形成法,特别是各种微型制备装置的研究起步较晚,很不成熟,还有一些问题有待解决。

  例如: 制备效率不高、脂质体粒径分布广、制备得到的脂质体缺乏高效收集方法。现有收集方法常需要复杂的后处理操作,很多脂质体损坏或丢失,对实际制备产率造成了很大影响。

  本研究提出一种基于微电极阵列的制备及收集微流控芯片,利用微电极阵列、多微通道结构精确控制巨型脂质体的形成,提高效率和粒径均匀性; 通过集成过滤收集模块,可实现巨型脂质体的温和、高效收集,从而实现一种简单、高效的巨型脂质体制备方法。

  2 实验部分

  2. 1 微芯片的设计及加工

  微流控芯片包括制备和分选收集两个部分,之间通过微通道连接。用函数信号发生器向微电极阵列提供电信号,通过注射泵向微通道注入脂质溶液、收集缓冲液,抽出废液等( 图 1A) .

  在制备腔室中包含两种微电极阵列结构进行对比分析。一种为交错电极阵列结构( 图1B) ,包括两个互不接触、交叉排布的梳状微电极阵列,每个梳脊上分布有多个梳齿,梳脊宽度为 200 #m,梳齿宽度为 80 #m; 梳齿上微电极宽度和长度均为 20 #m.每个梳齿上均匀地分布有大量微电极,相邻微电极间距为 60 #m,相对微电极距离也为 60 #m.阵列中电场非均匀分布,微电极顶端电场强度最大( 图 1B) .

  另一种微电极阵列为简单的平板电极阵列结构( 图 1C) ,也由两个互不接触、交叉排布的梳状微电极阵列共同组成,每个梳状微电极上不再有梳齿,因而电场分布均匀,强度弱于交错电极电场的较大区域( 图 1C) .微电极阵列也构成了微通道的侧壁,所形成通道深度为 42 μm.

  分选收集部分包含收集腔室和废液腔室( 图 1A) ,采用聚二甲基硅氧烷( Polydimethylsiloxane,PDMS) 构建。收集腔室分上下两层,上层直径为 14 mm,下层直径为 8 mm,两层腔室之间通过微孔滤膜( 10. 0 μm 圆形滤孔,滤膜直径13 mm,每盒100 张滤膜,Whatman,Britain) 分隔,制备腔室通过微通道与收集腔室上层连接,收集腔室下层通过微通道连接贯穿上下层 PDMS 的废液腔室( 直径 14 mm) .

  微电极阵列部分采用 MEMS 加工工艺,先将石英玻璃基底和硅片键合; 在硅表面溅射一层厚度为20 nm 的 Cr 以提高硅与金属层( 金) 之间的粘附性; 在 Cr 金属层上溅射一层厚度为 2 #m 的金层( Au) ,进一步降低微电极阵列的电阻率,提高其电气性能; 使用 KI 溶液腐蚀 Cr-Au 双金属层; 采用感应耦合等离子工艺刻蚀硅,形成微电极阵列。

  微通道和腔室部分则主要采用 PDMS 进行复制模塑法加工: 光刻聚丙烯基板作为模板; 将 PDMS 预聚物与固化剂按照 10∶1 的比例调配后倒于模板上固化,复制模板图形; 然后将复制有结构的 PDMS 层与基底键合,构成腔室和微通道结构; 微孔滤膜用 PDMS 固定于收集腔室上层与下层交界处。

  2. 2 仪器、试剂与材料

  DMI4000 B 倒置荧光显微镜( 德国 Leica 公司) ,BT223S 电子天平( 德国 Sartorius 公司) ,细胞型1820A 摩尔超纯水机( 摩尔水处理设备公司) ,真空干燥箱( 科恒达仪器公司) ,EE1410 合成函数信号发生器( 新联电讯仪器公司) ,显微镜专用温控平台( 江南永新光学公司) .

  磷脂酰胆碱( 1,2-Diacyl-sn-glycero-3-phosphocholine,PC) 、胆固醇( 3β-Hydroxy-5-cholestene,choles-terol,Chol) 购自美国 Sigma-Aldrich 公司; 乙醚、NaCl、蔗糖、葡萄糖购自中国科龙化工公司; PDMS 购自美国 Dow Corning 公司。聚丙烯基板( 2 mm 厚) 购自中国新涛公司; 玻璃片、ITO 玻璃、导电胶布购自中国珠海凯为公司。

相关标签:
  • 报警平台
  • 网络监察
  • 备案信息
  • 举报中心
  • 传播文明
  • 诚信网站