2 结果与分析
2.1 培养基法测定花粉管生长时间
花粉管的生长需要一定的时间，在2号培养基上培养不同时间，放到40倍显微镜下观察花粉管的生长，情况如图1所示。培养40 min时花粉刚萌发如图1A;培养 60 min 时花粉管萌发如图 1B（此时花粉管的长度约为花粉粒的3倍）；培养90 min花粉管基本停止生长如图1C,此时花粉管的长度约为培养60 min时的2 倍。
2.2 不同培养基对花粉萌发率的影响
影响花粉萌发的重要原因有蔗糖和硼酸[8].蔗糖不仅为花粉萌发和花粉管的生长提供营养和所需要的碳源，还能帮助花粉维持外界环境一定的渗透压[9].
花粉培养基的主要成分是硼酸，硼酸不仅能增加花粉对糖的吸收、运转和代谢，增加氧的吸收，还能促进花粉的萌发和花粉管的伸长[10].硼酸与糖结合不仅提高了花粉管的萌发率，还促进了果胶的合成[11].笔者设计了6个培养基配方，实验结果显示花粉在6种培养基上全部萌发，10倍显微镜下观察萌发情况，如图2.统计花粉萌发率结果如表2所示，通过对①号培养基与④号培养基、②号培养基与⑤号培养基、③号培养基与⑥号培养基的花粉萌发率观察硼酸对花粉萌发的作用，由3组对比可以看出100 mg/L的硼酸比10 mg/L的硼酸花粉萌发率高。由①号与②号、④号与⑤号2组培养基可以看出蔗糖对花粉萌发的影响：5 g比0.5 g蔗糖花粉萌发率高。由②号与③号、⑤号与⑥号2组培养基可以看出琼脂对于花粉萌发的影响：1 g比0.5 g琼脂花粉萌发率高。
2.3 不同储存条件下的花粉萌发率
分别观察存放于室温（27℃左右）和冰箱冷藏室（4℃）下花粉把不同保存天数后的萌发率，在 2 号培养基上花粉萌发60 min后放到40倍的显微镜下观察，每个处理3个重复，每个重复随机观察5个视野，观察花粉的萌发情况如表3所示。
对于花粉来说，在自然状态下花蕾开放成熟花药很快即可散粉，花药散粉后由于花粉受外界环境的影响（风吹、日晒、雨淋等）较大，所以多数品种散粉当日萌发率最高[12].由表3可以看出，室温（27℃左右）保存前3天的花粉萌发率较高，为54.3%（大于50%），第9天的花粉萌发率下降至25.4%,36天时花粉萌发率为0;冰箱冷藏室（4℃）保存的花粉前 5 天的花粉萌发率较高，为50.2%（大于50%），随后花粉萌发率逐渐下降，第9天的花粉萌发率下降至28.7%,直到40天时萌发率为0.从表3还可以看出，相同保存天数下花粉在冰箱冷藏室（4℃）保存比在室温（27℃左右）保存萌发率高。为延长花粉寿命，采用冰箱冷藏室（4℃）保存方法，为保证授粉率及结果率，选择花粉萌发率在50%以上的花粉进行授粉。
3 结论与讨论
（1）在不同的贮藏条件下不同种类的植物和不同花粉品种的生活力表现不同且贮藏寿命不同，可根据现有条件、植物种类、目的和所需时间选择合适的花粉贮藏方法[13].由于花粉在开花初期成熟的花粉少且萌发率低，而在盛花期花粉的生活力大大提高，但到开花的末期，由于受精结果等作用使植物的营养发生转移，导致未成熟的花粉因得不到足够的营养而发育变差，所以在对植物花粉进行采集时应主要集中在盛花期[14].
本实验在采集国槐花粉的过程中发现，采集花粉的最佳时间在天气晴好的上午9-10时，在此时间段采集的花粉效果最好；在雨天或雨后采集的花粉，花药含水量高，花粉不宜散落，且花粉的生活力严重衰弱[15].
（2）在诸多的外部因素中，温度和湿度是主要影响因素[16],气压也能够影响花粉贮存寿命[17].实验结果显示国槐花粉在室温（27℃左右）下花粉寿命约为35天，在冰箱冷藏室（4℃）条件下花粉寿命约为 39 天。一般情况下，花粉在低温、低湿和无氧的条件下比在高温、高湿和有氧条件下更易于保存。低温能明显地延缓花粉的衰老[18],并且花粉的保存效果随温度的降低而越好，这是因为花粉的呼吸强度和酶活性随温度的降低而降低[19].在低温4、0℃等条件下，花粉的呼吸消耗和酶活性并没有停止，但随着时间的推移，花粉生活力不断降低，直至死亡，所以低温保存适于花粉的短期保存[20].现实中进行花粉授粉，一天是难以完成的，所以为了保证花粉的萌发率且方便野外携带，便于授粉，笔者只观察了2种简单、便于携带的保存方法：冰箱冷藏室（4℃）与室温（27℃左右）保存。沈根华等[20]认为梨树花粉萌发率低于30%时，在作为授粉品种时不加填充剂或不作授粉用。本研究为了提高国槐的授粉率及结果率，采用的花粉萌发率不低于50%.从表3可以看出，国槐花粉在冰箱冷藏室（4℃）保存时前 5 天的花粉适于花粉授粉，而室温（27℃左右）保存的花粉前3天适于花粉授粉，所以冰箱冷藏室（4℃）比室温（27℃左右）更适于国槐花粉野外授粉的保存。
（3）硼酸是花粉离体培养基的主要成分，对花粉的萌发和花粉管的伸长有促进作用。[21].到目前为止，有关的研究均认为花粉的萌发和花粉管的生长与硼酸有关。在以矮牵牛花粉为试材的研究中发现，有硼酸的培养基更有利于花粉管的生长[22].不同浓度的硼酸对于花粉的萌发和生长有不同影响[23].本实验研究结果表明，国槐花粉萌发率在相同条件下10 mg/L的硼酸比100 mg/L的硼酸萌发率高。
（4）检验花粉保存方法是否适当主要看花粉的生活力，而现实应用中，很容易将花粉萌发率与花粉生活力混淆，不能明确区分[24] .首先应该明确花粉生活力是指花粉产生种子的能力，而能萌发的花粉却不能确定其一定能在授粉后产生种子。因此本实验取得的结论仅为初步结果，若想深入了解国槐花粉寿命及其生活力情况，还需进一步研究探讨。
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