兽医硕士开题报告精选(3)

1.3.2 间充质干细胞的临床应用
　　1.3.3 诱导多能干细胞的临床应用
　　1.3.4 羊膜干细胞的临床应用
　　1.4 本研究的目的及意义
　　
　　2 马羊膜上皮细胞的分离和培养
　　
　　2.1 材料、试剂和仪器
　　2.1.1 实验材料
　　2.1.2 实验试剂
　　2.1.3 实验仪器
　　2.2 研究内容与方法
　　2.2.1 马羊膜细胞层的分离
　　2.2.2 Trypsin-EDTA或TrypLE消化分离马羊膜细胞
　　2.2.3 马羊膜细胞的传代培养
　　2.2.4 马羊膜细胞的冻存与复苏
　　2.2.5 马羊膜细胞数和细胞活力的测定
　　2.2.6 马羊膜上皮细胞生长曲线的绘制
　　2.2.7 马羊膜上皮细胞倍增时间的测定
　　2.3 结果
　　2.3.1 马羊膜上皮细胞分离和培养影响因素的研究
　　2.3.2 马羊膜上皮细胞的培养
　　2.3.3 马羊膜上皮细胞生长曲线
　　2.4 讨论
　　2.5 小结
　　
　　3 马羊膜上皮细胞干细胞特性的鉴定
　　
　　3.1 实验材料、试剂和仪器
　　3.1.1 实验材料
　　3.1.2 实验试剂
　　3.1.3 实验仪器
　　3.2 研究内容与方法
　　3.2.1 免疫荧光染色方法检测
　　3.2.2 RT-PCR检测
　　3.2.3 FACS扫描
　　3.3 结果
　　3.3.1 免疫荧光染色检测结果
　　3.3.2 RT-PCR检测结果
　　3.3.3 FACS扫描结果
　　3.4 讨论
　　3.5 小结
　　
　　4 马羊膜上皮细胞分化潜能研究
　　
　　4.1 实验材料、试剂和仪器
　　4.1.1 实验材料
　　4.1.2 实验试剂
　　4.1.3 实验仪器
　　4.2 研究内容与方法
　　4.2.1 马羊膜上皮细胞体外自发分化
　　4.2.2 马羊膜上皮细胞体内分化
　　4.3 结果
　　4.3.1 马羊膜上皮细胞体外自发分化
　　4.3.2 马羊膜上皮细胞体内分化
　　4.4 讨论
　　4.5 小结
　　
　　5 结论
　　
　　致谢
　　参考文献
　　
　　五、本研究的目的及意义
　　
　　羊膜上皮细胞（amniotic epithelial cells,AECs）来自于胎盘内层羊膜。羊膜保持前原肠胚时期胚胎细胞的可塑性和多能性，具有三种胚原基层细胞的分化潜能，可以分化成内胚层、中胚层和外胚层细胞。目前研究证实AECs具有胚胎干细胞的特性，表达胚胎干细胞的表面标记物“Oct4”和“Nanog”基因，又因为AECs取材方便、来源广泛、免疫原性低、不形成畸胎瘤，是再生医学组织工程学和细胞替代治疗的非常有应用前景的生物工程材料，从而使羊膜上皮细胞备受关注。目前人的羊膜细胞在临床上已用于治疗肝病、心脏病、神经系统疾病、糖尿病、肺病等多种疑难杂症。已有报道成功地分离获得了一些动物羊膜细胞，包括绵羊羊膜和羊水干细胞、猪羊水干细胞、马羊水干细胞、水牛羊水干细胞、牛羊膜和羊水干细胞等，而马羊膜上皮细胞（equine amniotic epithelial cells,e AECs）的研究报道资料很少，e AECs分离、培养和鉴定等研究内容尚未见报道。本研究建立了马羊膜上皮细胞（equine  amnioticepithelial  cells,e AECs）的分离和培养方法，采用免疫荧光染色、RT-PCR等方法对e AECs的干细胞特征进行了鉴定，最后通过实验研究了e AECs体外和体内的分化潜能，为马羊膜干细胞应用于临床治疗开展探索性的试验。