2. 3各组小鼠耳组织中的IL - 4含量 与生理盐水组相比，高浓度的DIDP（200mg /kg /d） 单独作用时未见小鼠耳组织中的IL - 4含量发生显着变化，但0. 5% FITC致敏组（FITC,FITC + DIDP 2,FITC +DIDP 20,FITC + DIDP 200,FITC + DIDP 200 + MT）小鼠耳组织的IL - 4含量均显着升高（P < 0. 01）。与FITC组相比，FITC + DIDP 20组和FITC + DIDP200组小鼠耳组织的IL - 4含量均显着地增加（P <0. 05或P < 0. 01） （ 图2A）。与FITC + DIDP 200组相比，FITC + DIDP 200 + MT组小鼠耳组织中的IL -4含量显着降低（P < 0. 01）。
2. 4各组小鼠耳组织中的IFN - γ含量 不同组别小鼠耳组织匀浆液中IFN - γ的表达水平无显着性差异，表明过敏性皮炎和DIDP不会导致小鼠耳组织Th1型细胞因子IFN - γ的含量发生改变（ 图2B）。
2. 5各组小鼠耳组织中的ROS水平 为了检测耳朵组织中的氧化水平，对耳朵组织中的ROS含量进行测定（ 图3A）。与saline组相比，高浓度的DIDP处理（DIDP 200组） 能导致耳组织中ROS含量显着增加（P < 0. 05） ,且0. 5% FITC致敏组（FITC,FITC+ DIDP 2,FITC + DIDP 20,FITC + DIDP 200,FITC+ DIDP 200 + MT） 的小鼠耳组织中ROS含量也显着增加（P < 0. 01）。与FITC组相比，FITC + DIDP 2和FITC + DIDP 20组的小鼠耳部组织中的ROS含量增加但不具有显着性，FITC + DIDP 200组的小鼠耳部组织中的ROS含量则极显着升高（P < 0. 01） .与FITC + DIDP 200组相比，FITC + DIDP 200 + MT组小鼠 耳 部 组 织 中 的ROS含 量 显 着 降 低 （P <0. 01） ,显示MT具有抗氧化作用，能够有效降低组织中的ROS水平。
2. 6各组小鼠耳组织中的GSH含量 为了进一步检测耳朵组织中的氧化水平，对耳朵组织中的GSH含量进行测定（ 图3B）。与saline组相比，单独的DIDP经口暴露和0. 5% FITC致敏组（FITC,FITC +DIDP 2,FITC + DIDP 20,FITC + DIDP 200） 均使小鼠耳部组织的GSH含量降低，且FITC + DIDP 200组的降幅最大（P < 0. 01）。与FITC + DIDP 200组相比，FITC + DIDP 200 + MT组的小鼠耳组织中的GSH含量显着升高 （P < 0. 01） ,这表明MT能有效地减轻小鼠耳组织的氧化损伤水平，降低GSH的消耗。
3讨 论
研究发现，大多数过敏性皮炎患者血液中的Ig E含量和抗原特异性T细胞分泌的IL - 4含量升高，但IFN - γ含量会维持在一个相对稳定的水平[16,].因为该类型过敏性皮炎属于Th2型免疫反应，Th2细胞因子如IL - 4可以抑制Th1细胞因子的表达，促进Ig E含量升高，导致Th1 /Th2细胞平衡向着Th2方向偏移。另外，Ig E交联可以导致肥大细胞脱颗粒，进而诱发下游炎症反应。FITC诱导的ACD动物模型的免疫学发病机制与上述过程相似，都属于Th2型免疫反应。利用ELISA法检测了小鼠血清中的Ig E及耳朵组织中的IL - 4和IFN - γ的含量，高浓度的DIDP（200mg /kg /day） 经口暴露后能够有效促进模型组小鼠Ig E和Th2细胞因子IL- 4的表达，而IFN - γ的含量则保持相对稳定，而单独的高浓度的DIDP却没有这种作用，表明DIDP可能作为一种佐剂加重过敏性皮炎。
最新研究发现，在正常生理状态下，自由基如ROS作为一个重要的第二信使参与调节细胞的生理活动[17].但过量的ROS则会通过细胞氧化应激反应诱导细胞凋亡甚至坏死[18].谷胱甘肽（GSH）是机体内重要的抗氧化剂和自由基清除剂[19,20].GSH不仅能清除人体自由基，还可以提高人体免疫力。ROS和GSH含量的变化能有效地评价小鼠耳部组织中氧化应激水平。因此，实验检测了小鼠耳部组织的ROS和GSH含量。与对照组相比，0. 5%FITC致敏的同时可以造成耳部组织的氧化损伤。与FITC组相比，高剂量的DIDP与FITC联合处理能导致小鼠耳部组织中的ROS水平进一步提高（P< 0. 01）。然而，MT处理能有效降低小鼠耳部组织中的ROS含量，减少还原剂GSH的消耗，从而有效减轻组织的氧化损伤。单独的DIDP经口暴露虽然不会导致过敏反应，但可造成小鼠耳部组织一定程度的氧化损伤（P < 0. 05）。
目前，研究发现生物体内ROS的大量积累以及GSH水平的大幅降低会导致体内氧化还原平衡失调，产生氧化应激反应，进而触发下游的炎症反应[21-22].抗原呈递细胞中的GSH水平影响Th1 /Th2细胞平衡，细胞中的GSH水平降低，可能会促进Th2型细胞因子的表达，而抑制Th1型细胞因子的表达[23].另外，在体内积累过量的ROS可能作为一种重要的信号分子诱导炎症因子如IL - 4的表达。因此，推测DIDP与FITC联合作用能恶化过敏性皮炎，并通过氧化应激反应介导。另外，研究发现胸腺基质淋巴生成素（Thymic stromal lymphopoietin,TSLP） 是多种过敏性疾病的一个重要启动因子，可以活化树突细胞，然后进一步诱发Th2型免疫反应。TSLP在一些急性和慢性过敏性皮炎患者的皮肤中过量表达，表明TSLP在过敏性皮炎的发生中发挥着重要作用。推测TSLP可能也参与介导DIDP经口暴露对FITC诱导的过敏性皮炎的恶化作用。
环境中污染物如DIDP长期经口进入人体后，可能会使机体呈现过敏性体质，在遇到过敏原刺激时可以恶化过敏性疾病，且氧化应激反应及其下游分子事件可能是DIDP发挥佐剂作用的一种分子途径。但过敏性疾病种类繁多，机制复杂，且小鼠与人体存在差异，所以本实验并不能完全解释人类过敏性疾病，因此，DIDP等污染物对过敏性皮炎的影响及相关机制还需要更深入的探究。
参考文献
[1] 谢沁珊，王杉杉，蔡凤云，等。塑料增塑剂DEHP环境污染水平、人体负荷及生物毒性的初步研究[J].公共卫生与预防医学，2010,21（5） :19-22.
[2]BANG DY,KYUNG M,KIM MJ,et al. Human risk assessmentof endocrine-disrupting chemicals derived from plastic foodcontainers[J]. Comprehensive Reviews in Food Science andFood Safety,2012,11（5） :453-470.
[3]STRINGER R,LABUNSKA I,SANTILLO D,et al.Concentrations of phthalate esters and identification of otheradditives in PVC children's toys[J]. Environmental Science &Pollution Research,2000,7（1） :27-36.
[4]CHO WS,JEONG J,CHOI M,et al. 26-Week carcinogenicitystudy of di-isodecyl phthalate by dietary administration to CB6F1-ras H2 transgenic mice[J]. Archives of toxicology,2011,85（1） :59-66.
[5]MCKEE RH,PRZYGODA RT,CHIRDON MA,et al. Di（isononyl）phthalate（DINP）and di（isodecyl）phthalate（DIDP）are not mutagenic[J]. Journal of Applied Toxicology,2000,20（6） :491-497.
[6]BORNEHAG CG,NANBERG E. Phthalate exposure and asthmain children[J]. International journal of andrology,2010,33（2） :333-345.
[7]JAAKKOLA JJ,KNIGHT TL. The Role of exposure to phthalatesfrom polyvinyl chloride products in the development of asthmaand allergies:A systematic review and meta-analysis[J].Environmental Health Perspectives,2008,116（6） :845-853.
[8]KIMBER I,DEARMAN RJ. An assessment of the ability ofphthalates to influence immune and allergic responses[J].Toxicology,2010,271（3） :73-82.
[9]LEUNG DYM,SOTER NA. Cellular and immunologicmechanisms in atopic dermatitis[J]. Journal of the AmericanAcademy of Dermatology,2001,44（1） :S1-S12.
[10]CHEN L,MARTINEZ O,OVERBERGH L,et al. Early up-regulation of Th2 cytokines and late surge of Th1 cytokines in anatopic dermatitis model[J]. Clinical & ExperimentalImmunology,2004,138（3） :375-387.
[11]FUCHS J,ZOLLNER TM,KAUFMANN R,et al. Redox-modulated pathways in inflammatory skin diseases[J]. FreeRadical Biology & Medicine,2001,30（4） :337-353.
[12]BRIGANTI S,CRISTAUDO A,D'ARGENTO V,et al. Oxidativestress in physical urticarias[J]. Clinical & ExperimentalDermatology,2001,26（3） :284-288（5）。
[13]RAO MV,CHHUNCHHA B. Protective role of melatonin againstthe mercury induced oxidative stress in the rat thyroid[J]. Food& Chemical Toxicology,2010,48（1） :7-10.
[14]REITER RJ,TAN DX,MAYO JC,et al. Melatonin as anantioxidant:biochemical mechanisms and pathophysiologicalimplications in humans[J]. Acta Biochimica Polonica,2003,50（4） :1129-1146.
[15] 林静，杨文敏，黄元新，等。广西保健食品近三年情况分析[J].公共卫生与预防医学，1999,10（3） :5-8.
[16]TAKESHITA K,YAMASAKI T,AKIRA S,et al. Essential roleof MHC II-independent CD4+T cells,IL-4 and STAT6 incontact hypersensitivity induced by fluorescein isothiocyanate inthe mouse[J]. International Immunology,2004,16（5） :685-695.
[17]STEINMAN L,CONLON P. Antigen specific immunotherapyof multiple sclerosis[J]. Journal of Clinical Immunology,2001,21（2） :93-98.
[18]EUA. Department of Health and Human Services. Agency fortoxic substances and disease registry. toxicological profile for di-n-butyl-phthalate[J]. Priority Substances List AssessmentReport,2001,18（3） :187-191.
[19]MATSUE H,EDELBAUM D,SHALHEVET D,et al. Generationand function of reactive oxygen species in dendritic cells duringantigen presentation[J]. Journal of Immunology,2003,171（6） :3010-3018.
[20] 陈燕，樊柏林，田洁，等。虾青素人参茶叶对老龄小鼠的抗氧化作用[J].公共卫生与预防医学，2016,26（2） :89-91.
[21]FUCHS J,ZOLLNER TM,KAUFMANN R,et al. Redox-modulated pathways in inflammatory skin diseases[J]. FreeRadical Biology & Medicine,2001,30（4） :337-353.
[22]D 'AUTREAUX B,TOLEDANO MB. ROS as signallingmolecules:mechanisms that generate specificity in ROShomeostasis[J]. Nature Reviews Molecular Cell Biology,2007,8（10） :813-824.
[23]OH PS,LIM K,LIM KT. Phytoglycoprotein（75 k Da）inhibitsexpression of interleukin-1beta stimulated by DEHP in humanmast cells[J]. Cell Biochemistry & Function,2010,28（5） :352-359.
